[发明专利]一种基于玻璃毛细管的牛血清白蛋白检测探针及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201610987386.9 | 申请日： | 2016-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN106771226B | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 青琳森;王乾龙;丁立生;梁健;饶亮明;李兴德;蒋立银;帅克 | 申请（专利权）人： | 中国科学院成都生物研究所;中国科学院成都生物研究所湖州生物资源利用与开发创新中心 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610041 四川省成都市*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 牛血清白蛋白 检测探针 玻璃毛细管 制备方法和应用 制备 氨基丙基三乙氧基硅烷 特异性结合反应 氨基 过氧化氢溶液 可视化检测 氨水溶液 标记抗体 表面修饰 反应条件 活化状态 大生产 灵敏度 抗原 活化 键合 抗体 羟基 检测 | ||
1.一种基于玻璃毛细管的牛血清白蛋白检测探针的应用，其特征在于，其包括：
步骤a：用辣根过氧化物酶标记羊抗牛血清白蛋白，得到辣根过氧化物酶标记的抗体；
步骤b：将待测样品与所述辣根过氧化物酶标记的抗体混合，震荡反应4-8min；随后，再与牛血清白蛋白检测探针混合，震荡反应4-8min，洗涤，得到结合辣根过氧化物酶的牛血清白蛋白检测探针；
步骤c：在所述结合辣根过氧化物酶的牛血清白蛋白检测探针中加入四甲基联苯胺溶液，静置12-18min进行显色，随后加入H2SO4终止显色，于445-455nm处检测吸光度，采用标准曲线法得出所述待测样品中牛血清白蛋白的含量；
其中，所述牛血清白蛋白检测探针的制备方法包括：
活化步骤：将玻璃毛细管与氨水溶液混合，并于65-90℃下浸泡7-15min,随后将所述玻璃毛细管取出后再与过氧化氢溶液混合，并于65-90℃下浸泡7-15min，然后再用有机溶剂洗涤所述玻璃毛细管，得到活化后的玻璃毛细管；
修饰步骤：以甲苯为溶剂配制3-氨基丙基三乙氧基硅烷溶液，所述3-氨基丙基三乙氧基硅烷的质量分数为3-5％，随后将所述3-氨基丙基三乙氧基硅烷溶液与所述活化后的玻璃毛细管混合，并于20-30℃下搅拌18-24h，然后再用所述有机溶剂洗涤所述玻璃毛细管，得到氨基修饰的玻璃毛细管；
键合步骤：将牛血清白蛋白与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺混合，于20-30℃下搅拌1-3h；随后与所述氨基修饰的玻璃毛细管混合，于20-30℃下搅拌4-6h，洗涤，得到所述牛血清白蛋白检测探针。
2.根据权利要求1所述的一种基于玻璃毛细管的牛血清白蛋白检测探针的应用，其特征在于，在所述活化步骤中，所述氨水溶液中氨水与水的体积比为1：3-5。
3.根据权利要求1所述的一种基于玻璃毛细管的牛血清白蛋白检测探针的应用，其特征在于，在所述活化步骤中，所述过氧化氢溶液中过氧化氢与水的体积比为1：1-3。
4.根据权利要求1所述的一种基于玻璃毛细管的牛血清白蛋白检测探针的应用，其特征在于，所述有机溶剂选自丙酮、四氢呋喃和甲苯中的一种或多种。
5.根据权利要求4所述的一种基于玻璃毛细管的牛血清白蛋白检测探针的应用，其特征在于，在所述活化步骤和所述修饰的步骤中，所述洗涤的步骤为将所述玻璃毛细管依次用丙酮、四氢呋喃、以及甲苯各洗涤2-5次。
6.根据权利要求1所述的牛血清白蛋白检测探针的应用，其特征在于，所述步骤c为在所述结合辣根过氧化物酶的牛血清白蛋白检测探针中加入四甲基联苯胺溶液，静置15min进行显色，随后加入H2SO4终止显色，于450nm处检测吸光度，采用标准曲线法得出所述待测样品中牛血清白蛋白的含量。
7.根据权利要求6所述的牛血清白蛋白检测探针的应用，其特征在于，所述待测样品为疫苗。
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