[发明专利]一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法

说明书

本发明涉及一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法，所述方法采用的是直接串联‑反相‑亲水作用色谱质谱联用方法，所述方法包括如下步骤：步骤1样品溶液的制备；步骤2标准系列溶液的制备；步骤3内标溶液的制备；步骤4供试品溶液的制备；步骤5取步骤4所得溶液注入直接串联反相‑亲水作用液相色谱质谱联用系统，得到31种分析物的提取离子流图，根据提取离子流图计算复方丹参提取物或相关药材中31种成分的含量。

技术领域：

本发明涉及一种中药有效成分的检测方法，特别涉及一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法。

背景技术：

质量平衡的研究对于阐明中药化学物质组的组成具有重要意义。中药化学物质组成极其复杂，含有众多的初生代谢产物和次生代谢产物。

前期研究表明，复方丹参滴丸(由丹参、三七、冰片制成，具体制备方法见《中国药典》2015年版)主要含有寡糖、氨基酸、核苷、有机酸、酚酸、皂苷和丹参酮类化合物。由于这些化合物的结构、物理化学性质差异大，研究者们通常多采用多种分析方法对不同类型的化合物进行定量分析，例如使用氨基酸分析仪检测氨基酸，使用高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测寡糖和皂苷，使用高效液相色谱-紫外检测器或液相色谱质谱联用仪对酚酸和丹参酮。多种分析方法的应用为质量平衡的研究带来了极大不便。

反相色谱：流动相极性大于固定相极性的情况，称为反相色谱。非极性键合相色谱可作反相色谱。在现代液相色谱中应用最广泛，现代液相色谱分析工作的70％以上是在非极性键合固定相上进行的。

亲水作用色谱：可以被看作正相色谱向水性流动相领域的延续。流动相是水相缓冲液(＜40％)及有机溶剂。固定相是强亲水性的极性吸附剂，如硅胶键合相，极性聚合物填料或离子交换吸附剂。这些固定相的共同特点是它们和水的作用力很强，因此属于“亲水性”。使用的梯度和反相模式相反。初始条件包括高比例有机相，典型的浓度是95％有机相如乙腈，逐步降低到水相。因此，又被称为反反相色谱。

直接串联-反相-亲水作用色谱质谱联用系统：将两种分离模式的色谱柱直接串联，使得从强极性到弱极性的物质均能得到较好的保留，从而达到分离的目的。

复方丹参提取物或相关药材为现有药物，由三七、丹参和冰片经过加工制备而成。具有活血化瘀，理气止痛之功效。用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛；冠心病心绞痛见上述证候者。

本发明所述复方丹参提取物或相关药材包括市售的复方丹参制剂，如复方丹参滴丸或复方丹参片，也包括三七和丹参的共同提取物或分别提取再混合的提取物，所述提取物市场上有售，如复方丹参浸膏、丹参浸膏、三七浸膏，也可参考现有技术中的制备方法制备得到，也包括三七和丹参药材，如丹参粉末和三七粉末。

本发明所述复方丹参提取物或相关药材，其中的31种有效成分分别为：腺嘌呤、琥珀酸、焦谷氨酸、腺苷、尿苷、丹参素、缬氨酸、赖氨酸、脯氨酸、原儿茶醛、葡萄糖、蔗糖、精氨酸、丹酚酸D、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、迷迭香酸、三糖、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、人参皂苷Rb1、丹酚酸C、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rd、四糖、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA。

针对现有质量平衡研究方法的不足，本研究建立了直接串联-反相-亲水作用色谱质谱联用系统，可以对复方丹参提取物或相关药材中的7大类、31种成分进行同时测定。

本发明建立了直接串联-反相-亲水作用色谱质谱联用系统，对复方丹参提取物或相关药材中性质差异极大的7大类、31种成分进行测定，可应用于复方丹参提取物或相关药材的质量评价，具有全面、准确、快速的特点。

发明内容：

本发明提供了一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法，该方法采用的是直接串联-反相-亲水作用色谱质谱联用。

本发明提供的方法包括以下步骤：