[发明专利]基于裂开型多肽为识别分子的检测方法

说明书

本发明涉及基于“裂开型”多肽为识别分子的检测方法，具体地说是一种将可以识别目标物的完整肽链裂开为两条多肽作为识别分子检测目标物质含量的方法。以“裂开型”两条能够特异性识别待测目标物的短肽a和b作为识别分子，将识别分子与待测目标物特异性识别形成三维结构，形成夹心模式进而实现对待测目标物的定量检测。本发明提出的裂开型多肽对目标物具有良好的选择性识别性能，并且可以用做多种传感器的主要组成部分，有重要的科学价值和广阔的市场前景。

技术领域

本发明涉及基于“裂开型”多肽为识别分子的检测方法，具体地说是一种将可以识别目标物的完整肽链裂开为两条多肽作为识别分子检测目标物质含量的方法。

背景技术

多肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,由一种或多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成。多肽已作为一种高效的识别分子用于对目标物的识别与检测。多肽作为一种优秀的人工受体主要表现在以下几点：1.技术相对成熟；2，成本相对较低；3，易于修饰。与抗体、核酸适体一样，多肽也展示出了对离子、分子、蛋白质、细胞的特异性识别，并且表现出良好的性能。

但是，现有基于多肽为识别分子的传感器多采用竞争性键合，修饰与测定过程较为复杂，难以用于“夹心法”反应，应用范围较窄，采用裂开型多肽为识别分子可以对两段肽链分别修饰，实现对目标物的一步识别并检测，极大的扩大了多肽在传感器领域的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于裂开型多肽为识别分子的检测方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种基于“裂开型”多肽为识别分子的检测方法，以“裂开型”两条能够特异性识别待测目标物的短肽a和b作为识别分子，将识别分子与待测目标物特异性识别形成三维结构，形成夹心模式进而实现对待测目标物的定量检测。

所述“裂开型”两条短肽的整体为至少包括10个氨基酸的肽链；其中，“裂开”位点应在整条肽链的中心三分之一至三分之二处。

所述两条能够特异性识别待测目标物的短肽a和b两端分别修饰，并应用于“夹心法”传感器。

所述短肽a的C端(或N端)通过共价键或亲和反应进行修饰；所述短肽b的N端(或C端)通过荧光标记、共价修饰酶或共价键进行修饰。

所述“裂开型”两条短肽的整体肽为对离子、小分子、多糖、蛋白质或细菌可识别的多肽；所述目标物质为离子、小分子、多糖、蛋白质或细菌。

所述“裂开型”两条能够特异性识别待测目标物的短肽a和b序列分别为a、GVHRLANGK与b、NWGEAFSA，a’、FSAGVHRLANGK与b’、biotin-NWGEA或a”、RLANGK、；b”、NWGEAFSAGVH；进而特异性识别单增李斯特菌。上述，“裂开型”多肽包括将完整的肽链在适当位点分裂后形成的片段a和片段b，二者与目标物会发生特异性结合。所述的完整的肽链具有对目标物的特异性识别能力；所述的适当位点是指在该位点对完整的肽链进行分裂后的多肽仍能保持对目标物的特异性识别能力；所述的片段a和片段b在没有目标物存在时不会发生相互作用，当目标物存在时，片段a和片段b与目标物发生特异性结合。片段a的C端(或N端)可以通过共价键修饰在电极表面，或者通过亲和反应修饰于磁珠、磁纳米颗粒上，达到固定的或者分离的目的。片段b的N端(或C端)可以进行荧光标记、共价修饰酶以及共价修饰电化学活性基团，达到对目标物进行识别的目的。目标物存在时，裂开的两条肽链与目标物结合形成特殊的三维结构。片段b上的活性物质可以直接或间接的引起电化学信号、荧光信号的改变，信号改变的大小与目标物的浓度是成比例的，进而实现对目标物浓度的测定。

所述共价键修饰在电极表面为通过酰胺键、金－硫键修饰在电极表面。

所述电极为玻碳电极、石墨电极、金属电极、ITO导电玻璃电极、丝网印刷电极或纸芯片电极。