[发明专利]一种用于甜叶菊培养基的中草药提取液及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于甜叶菊培养基技术领域，具体地，涉及一种用于甜叶菊培养基的中草药提取液及制备方法。

背景技术

近年来甜叶菊组织培养技术发展很快，在组织培养过程中，常存在细菌等微生物污染问题，导致甜叶菊组织培养质量差，效率低，严重营养甜叶菊的种植产量，是困扰本技术领域研究人员的一个难题。

甜叶菊组织培养过程中产生的微生物污染主要来自两方面：一是植物材料本身带菌；二是操作者及空气中所带微生物所致；另外，污染还可能由于培养基带菌，操作用具带菌的交叉污染所致。污染的微生物分为细菌及真菌两大类。细菌污染的特点是：菌斑呈粘液状，而且在接种后2～3d即可发现。甜叶菊组织培养过程中产生微生物的环节主要有：污染工作人员使用了未经充分消毒的工具及呼吸时排出的细菌所引起的，有时也因操作人员用手接触材料或器皿边缘，这也增加了微生物落入材料或器皿的机会，应特别注意避免交叉污染，如已灭菌的接种工具被消毒不够彻底的超净工作台面污染后又污染消毒过的材料和已灭菌的培养基等。真菌污染一般多由接种室的空气污染造成。形成的原因，一是接种室的空气本身未经很好消毒，二是操作时由于打开瓶盖时真菌孢子落入瓶内。

因此通常情况下在组织培养的各个环节中均要严格按照无菌操作的要求，进行无菌培养，外植体经过消毒灭菌后，接种于灭菌过的培养基中，即进入无菌培养的环节。培养室内需清洁少菌，采用的方法有在室内装紫外灯，定期开灯灭菌，还可用高锰酸钾和甲醛混合液定期熏蒸等。上述防止组织培养过程中微生物污染的措施均有一定效果，其不足之处在于，各个抑菌环节孤立，不能形成完整统一的抑菌链，若过程中任意一个环节操作疏忽，微生物便乘虚而入，致使组织培养失败，降低组织培养质量和效率，此外，通过对培养基灭菌，无菌接种，在无菌环境中培养，均为通过外在操作达到灭菌抑菌的目的，这些环节中一旦任何一个环节做的不到位则感染细菌等微生物，因此需要一种持续发挥抑菌功能的措施，使甜叶菊外植体长期处于一个无菌环境，同时增强甜叶菊外植体的内在抑菌能力，抵抗外来微生物的污染。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的一方面提供一种用于甜叶菊培养基的中草药提取液，针对现有甜叶菊组织培养中抑菌措施的不足，通过在甜叶菊基本培养基中加入中草药，使培养基处在免疫环境里，防治外来细菌等微生物的污染，从而达到高效且持续抑菌的效果，同时提高甜叶菊外植体自身抵抗力，减少人力物力投入，降低成本。另一方面提供所述用于甜叶菊培养基的中草药提取液的制备方法，所述方法操作简单，提取效果好。

根据本发明的一个方面提供一种用于甜叶菊培养基的中草药提取液，所述用于甜叶菊培养基的中草药提取液中含有的中草药包括如下重量份数的组分：降香10～15份、荜拔9～14份、山慈菇6～10份、海金沙7～10份、扁姜4～8份、十大功劳7～11份。

优选地，所述用于甜叶菊培养基的中草药提取液中含有的中草药包括如下重量份数的组分：降香12～14份、荜拔11～13份、山慈菇7～9份、海金沙8～9份、扁姜5～7份、十大功劳8～10份。

优选地，所述用于甜叶菊培养基的中草药提取液中含有的中草药包括如下重量份数的组分：降香13份、荜拔12份、山慈菇8份、海金沙8份、扁姜6份、十大功劳9份。

优选地，所述中草药提取液用于所述甜叶菊愈伤组织培养基、原球茎培养基、继代培养基、传代培养基或生根培养基中的任一培养基。

优选地，所述愈伤组织培养基、原球茎培养基、继代培养基、传代培养基或生根培养基中的任一培养基用于采用茎或叶作为外植体的甜叶菊组织培养。

根据本发明的另一个方面，提供所述的用于甜叶菊培养基的中草药提取液制备方法，所述方法包括如下步骤：

（1）将所述降香、荜拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功劳分别用清水浸泡20～30分钟，捞出后清水冲洗2～3次，分别加入乙醇进行浸提2～3小时，过滤后得所述降香、荜拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功劳预提取液；

（2）将所述步骤（1）中的降香、荜拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功劳预提取液分别加2～3倍重量水，蒸煮至所述乙醇全部挥发完，制得所述降香、荜拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功劳提取液；

（3）将所述步骤（2）中的降香、荜拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功劳提取液混合，搅拌均匀，即得所述用于甜叶菊培养基的中草药提取液。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：