[发明专利]一种有效观察油棕雌蕊解剖结构的石蜡切片方法

说明书

本发明公开了一种有效观测油棕雌蕊解剖结构的石蜡切片方法，包括石蜡切片过程中样品的取样固定、保存整染、水洗返蓝、脱水透明加碎蜡、透蜡包埋、修蜡块、切片、展片、粘片、烘干、封片、烘片、观片等步骤。本发明采用石蜡切片技术可有效获得油棕雌蕊结构完整的石蜡切片，样品经石蜡包埋后，样品不受其褐变影响，能够长久保存，切片时间随意，获得的切片平整、无皱褶、厚度均匀，显微结果清晰，有利于开展油棕种质资源解剖结构的观察和研究，在培育适合我国栽培的品种或筛选优良种质资源类型的工作中具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及显微观察植物样品技术领域，尤其涉及一种植物组织石蜡切片方法，具体涉及一种有效观测油棕雌蕊解剖结构的石蜡切片方法。

背景技术

油棕(Elaeis guineensis Jacq.)属于棕榈科油棕属的多年生木本油料作物，是世界上生产效率最高的产油植物，有“世界油王”之称。油棕用途广泛，主要产品为棕榈油和棕榈仁油，在食品、化工及生物能源等方面都有使用。

油棕在自然界的生殖方式为有性生殖方式，花是其重要的生殖器官。油棕的花为雌雄同株异序，雌蕊包括柱头、花柱和子房，子房受精后发育成为果实，而子房中的胚珠发育成为种子。雌蕊解剖结构研究作为鉴定种质资源的重要依据之一，常作为评价植物结果情况和适应性强弱的重要手段，主要是通过利用植物组织切片在显微镜下观察其结构的特征而得以实现。因此，探索有效获得切片的方法在鉴定评价大量油棕种质时有重要的应用价值，有利于缩短油棕种质资源的鉴定周期。

作为植物组织切片的主要方式，冷冻切片虽然制作周期短，但由于油棕雌蕊本身组织结构易褐化、组织结构密实，冷冻切片切出的片子结构不易完整，切出片子无法长久保存，而且在冷冻切片过程每次都需取新鲜样品进行固定和切片，很受取样的限制，不够灵活，不适宜于油棕雌蕊的观察。

探索适合的石蜡切片技术应用于油棕组织解剖结构及细胞学研究中是一个重要问题，以前虽有其它植物组织石蜡切片的报道，但是，不同种类的植物组织有不同的特性，相关结果虽然有借鉴意义，却不能完全应用于油棕组织切片研究。

目前，尚未见将石蜡切片技术应用于油棕雌蕊解剖结构研究的报道。

发明内容

本发明的目的是提供了一种有效观测油棕雌蕊解剖结构的石蜡切片方法，采用石蜡切片技术可有效获得结构清晰、完整的石蜡切片，有利于根据雌蕊的解剖结构开展油棕种质资源的鉴定和评价工作，对于培育或筛选适合我国栽培的油棕品种或种质资源具有重要意义。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供一种有效观察油棕雌蕊解剖结构的石蜡切片方法，包括以下步骤：

(1)取样固定：首先摘取所要观察油棕整个的雌花序，带回实验室立刻进行选择分割，选择需要观察的雌蕊，把接近花托部位的雌蕊完全剥下来，之后将萼片剥掉，立刻用刀将柱头与子房分开，立刻将柱头与子房一块放入盛有卡诺固定液的高型称量瓶(40×70mm)里面，每瓶的样品数目为4～6个，当所需的样品选取完后，用橡皮筋将牙签扎有8～12个洞的塑料薄膜包裹在瓶口上面，放在真空干燥器中，抽真空1～1.5个小时；其中：样品与卡诺固定液的质量体积比为1：16～1：20(g/ml)，卡诺固定液是按体积比3：1将乙醇与乙酸均匀混合构成；后面所述步骤中的材料与浸泡液的质量体积比范围均为1：16～1：20(g/ml)；针对油棕雌蕊中胚珠非常接近花托部位的特点，本发明该步骤的取样操作能够有效观察到油棕雌蕊中的胚珠结构；

(2)保存：样品经抽真空固定后，经浓度95％乙醇、85％乙醇，每级浸泡20～25min，之后转入浓度70％乙醇中浸泡2～3d保存备用，保存温度为16～18℃。保存温度为16～18℃有利于降低油棕组织的生命代谢过程，而又不会对其产生冻害作用，可以保存较长时间。