[发明专利]复合佐剂及含有该复合佐剂的疫苗

说明书

本发明公开了一种免疫复合佐剂及其制备方法，以及该免疫复合佐剂增强疫苗免疫作用的用途。本发明还涉及包含该免疫复合佐剂的疫苗组合物，以及该疫苗组合物在治疗相关疾病中的用途。

技术领域

本发明涉及一种复合佐剂及其制备方法。相对于单一佐剂，该复合佐剂诱导Th1型免疫反应漂移，以及该复合佐剂增强针对胞内菌例如结核分枝杆菌等以及病毒的免疫应答。

背景技术

第一代疫苗一般为减毒活疫苗或灭活全菌体疫苗，这类疫苗免疫原性强，但除了诱导保护性免疫反应外，还诱导免疫病理反应。而今研究的新疫苗主要为保护性抗原或抗原表位，相对于第一代疫苗，这些抗原免疫原性相对较弱，需要佐剂增强其免疫原性。佐剂作为疫苗组成部分增强抗原在体内诱导的免疫应答。

蛋白疫苗因其成份清楚，其安全性已得到认可，但由于抗原本身免疫原性较弱，一般需要佐剂(adjuvant)进行辅助。因此，蛋白疫苗一般由佐剂和抗原组成，佐剂与抗原一起注射或将佐剂预先注入机体增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。

佐剂种类很多，按其成份可分为无机佐剂(如氢氧化铝、明矾等)、有机佐剂(如微生物及其成份，包括卡介苗、短小棒状杆菌、胞壁酰二肽、BCG CpG、卡介菌多糖核酸等)和合成佐剂(如抗菌肽、人工合成的TLR激动剂等)。但批准进入临床研究的佐剂数量非常有限，MF59、AS03、AS04和脂质体是继铝佐剂后批准用于人体的佐剂[Mbow ML等，Curr OpinImmunol,2010,22:411-416.]。

2010年出版的《中华人民共和国药典》第三部记载的预防类疫苗所用佐剂基本为氢氧化铝(国家药典委员会编，《中华人民共和国药典》，P21-132,化学工业出版社，2010)。氢氧化铝是铝佐剂的一种，它主要增强抗原诱导体液免疫应答，而对于胞内菌，例如结核杆菌，机体主要通过细胞免疫应答清除。铝佐剂作为像结核蛋白疫苗这样的胞内菌蛋白疫苗的佐剂，其效果难以达到人们的要求。

水油微球通过独特方式增强天然免疫反应。MF59是一种水包油纳米级乳剂，该佐剂与抗原组成的疫苗主要采用肌肉注射免疫，MF59佐剂调节肌肉细胞暂时表达与免疫激活相关的基因和诱导的内源性ATP短暂释放促进细胞募集，迅速募集中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、CD11b+细胞到注射部位形成一个免疫增强微环境，同时募集的抗原提呈细胞摄取抗原并运送到引流淋巴结提呈给T细胞启动获得性免疫反应[Seubert A等,J Immunol,2008,180:5402-5412；Vono M等,Proc Natl Acad Sci USA,2013,110:21095-21100]，MF5为佐剂的疫苗诱导的细胞免疫一般以Th2型免疫为主，表现为血清以IgG1抗体为主、脾细胞中抗原特异的IL-4+IL-13+CD4+T细胞含量升高[Caproni E等,J Immunol,2012,188:3088-3098]。而MF59佐剂人16型乳头瘤病毒高剂量抗原E2腹腔注射则产生Th1型免疫反应漂移和细胞毒活性[Heinemann L等,Viral Immunol,2008,21:225-233]。虽然有实验证明TLR4激动剂E6020、TLR9激动剂CpG ODN分别与MF59组成复合佐剂可增强Th1型免疫反应漂移[Baudner BC,等,Pharm Res,2009,26:1477-1485；Singh M,等，Hum Vaccin Immunother,2012,8:486-890；Yang M,等,Int Immunopharmacol,2012,13:408-416]，但也有实验证明MF59与TLR激动剂组合只提高体液免疫反应，如MF59/CpG/HIV多价疫苗只提高体液免疫反应[Burke B,等,Virology,2009,387:147-156]。GLA-SE与MF59-E6020组成相似，同时辅佐性也很相似，SE作为结核分枝杆菌重组蛋白ID93的佐剂主要诱导Th2型免疫反应，同一蛋白以GLA-SE或GLA-SE/CpG为佐剂诱导Th1型免疫反应和保护性免疫反应，但两者通过不同的信号通路启动天然免疫[Bertholet S,等,Sci Transl Med,2010,2:53ra74；Orr MT,等,PLoS ONE,2014,9:e83884；Desbien AL,等,Eur J Immunol,2015,45:407-417；Orr MT,等,Eur J Immunol,2013,43:2398-2408]。