[发明专利]一种芦蒿脱毒苗的快繁方法

说明书

本发明公开了一种芦蒿脱毒苗的快繁方法，通过选取品种特性鲜明、健康芦蒿植株的中上部带节茎段作为外植体，经过腋芽诱导、脱毒培养、生根培养、移栽定植，最后形成完整的脱毒芦蒿种苗。本发明中芦蒿脱毒苗的繁殖速度快、脱毒效果好、脱毒种苗生长势强、遗传稳定性好，从外植体接种到形成可移栽试管苗，整个过程仅需90d左右，增殖系数可达20，解决了芦蒿生产中长期无性繁殖导致的种苗带病毒严重、产量品质下降的问题，实现了芦蒿脱毒苗快速繁殖，满足脱毒苗的规模化生产。

技术领域

本发明涉及一种芦蒿脱毒种苗的快繁方法，具体涉及一种芦蒿带节茎段在离体条件下组织培养获得脱毒试管种苗的快繁方法，属于生物技术领域。

背景技术

芦蒿是菊科蒿属多年生草本植物，营养丰富、清香脆嫩，具有清凉、平抑肝火、祛风湿、消炎、镇咳等功效，另外对降血压、降血脂、缓解心血管疾病均有较好的食疗作用，是一种典型的保健蔬菜，开发前景广阔。目前生产上，芦蒿主要是通过茎秆扦插无性繁殖的方式进行芦蒿生产和种苗保留，且种苗以群众长期自繁为主，品种感染病毒退化严重，严重影响芦蒿产量与品质。

中国专利201410291953.8公开了一种甘薯脱毒苗的制备方法，将薯块晒种后与成熟的香蕉放在一起，然后将薯块栽种在培养箱中催芽，剥取茎尖，分别诱导不定芽的分化和体细胞胚胎发生，经继代培养、炼苗、移栽后获得脱毒苗。中国专利201310724001.6公开了一种山葵脱毒苗的培养方法，选用无菌的山葵芽体为培养材料，经变温处理后，取其芽分生组织接入丛生芽分化培养基中，再经壮苗培养基和生根培养基的诱导培养而获得山葵脱毒苗。上述专利分别获得了甘薯脱毒苗和山葵脱毒苗，但由于植物和病毒的不同难以直接应用于芦蒿。目前，尚未有芦蒿脱毒苗的培养方法的报道。开展芦蒿脱毒种苗快繁体系研究，不仅有利于芦蒿优质品种的提纯复壮，更为脱毒种苗工厂化生产和脱毒种苗的定期更新提供技术支持。

发明内容

本发明的目的是提供一种能使芦蒿高效脱毒、恢复品种种性、快速繁殖和实现芦蒿种苗规模化供应的芦蒿脱毒苗的快繁方法，解决生产中长期通过无性繁殖保留种苗所导致的品种带毒退化的问题，为芦蒿生产提供优质脱毒种苗，提高芦蒿产量和品质。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种芦蒿脱毒苗的快繁方法，包括以下步骤：

(1)外植体的准备：选取田间生长健壮、品种特征鲜明的芦蒿植株，在其中上部剪取1～1.5cm健康的带节茎段作为外植体；

(2)外植体的灭菌：将选取的带节茎段置于流水中冲洗10～20min后，无菌条件下，用75％的酒精浸泡30～60s，再用84消毒液灭菌5～10min，无菌水冲洗后接种在MS培养基中；

(3)腋芽的诱导分化：将灭菌后的外植体接种在6-BA浓度为1.0-1.5mg·l^-1、NAA浓度为0.4-0.6mg·l^-1的MS培养基中；

(4)脱毒培养：诱导培养基上萌发出的不定芽长到高6±1cm小苗时，将小苗取出，去除叶片，切成1.0～1.5cm茎段，接种在2,4-D浓度为1.0mg·l^-1、KT浓度为0.2-0.4mg·l^-1的MS培养基中；

(5)生根培养：经脱毒培养的小苗长到高10±1cm时，将小苗切成带1-2节的茎段转入6-BA浓度为0.5-1.0mg·l^-1、NAA浓度为0.5-1.0mg·l^-1、活性炭百分比为0.02％的MS培养基中；

(6)脱毒组培苗移栽：将根系浓密，植株健壮的试管苗，移到与外界温度相近的室内，放置5～6d后旋开瓶盖，于自然散射光下炼苗7～9d后，洗净根表面培养基，植于营养土中，并做好防雨和保温措施，苗移栽成活后，再栽入有防虫措施的大棚中，用于芦蒿种苗的生产。