[发明专利]一种高效检测水产品中头孢菌素残留量的方法

权利要求书

1.一种高效检测水产品中头孢菌素残留量的方法，其特征在于，所述方法包括：样品经提取溶剂提取、多壁碳纳米管固相萃取净化后，采用超高效液相色谱C₁₈柱分离，三重四级杆质谱仪在多反应监测模式下测定，采用基质匹配法制作标准曲线进行外标法定量；

所述提取溶剂为乙腈、乙腈-水溶液或甲醇-偏磷酸水溶液；

所述头孢菌素为头孢哌酮、头孢喹肟、头孢洛宁、头孢唑啉、头孢匹林、头孢噻呋、头孢匹罗与头孢氨苄；

所述超高效液相色谱C₁₈柱为Acquity Xselect CSH C₁₈柱2.1 ×50 mm，1.7 μm；柱温40℃；

所述超高效液相色谱的色谱条件为：进样量10 μL；流速：0.3 mL/min；流动相A为0.05-0.2%甲酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱：0→3.0 min，90%→60% A; 3.0→4.0 min，60%→40%A; 4.0→5.0 min，40%→90% A; 5.0→6.5 min，90% A；

所述三重四级杆质谱仪的质谱条件为：电喷雾离子源，正离子模式；毛细管电压3.50kv；离子源温度120℃；脱溶剂气温度380℃；脱溶剂气流量600 L/h；锥孔气流量50 L/h；多反应监测扫描模式；

所述样品的处理方法为：称取5.0g样品于50mL离心管中，加入20mL体积比为4:1的乙腈-水溶液，涡旋振荡提取2min，5000r/min离心6 min，上清液转移至100 mL鸡心瓶中，残渣中再加入15mL乙腈-水溶液重复提取操作一次，合并两次提取液，加入4 mL饱和氯化钠溶液后于40℃旋转蒸发除去乙腈，向鸡心瓶中加入10 mL的0.10 mol/L磷酸盐缓冲溶液，涡旋混匀1 min使分析物充分溶解，全部上样过MWCNTs 小柱，再分别用6 mL磷酸盐缓冲溶液、6 mL水淋洗，最后用6 ml乙腈洗脱并接收洗脱液于45 ℃氮气吹干，用2 mL纯水充分溶解，过0.22μm水相滤膜后供UPLC-MS/MS仪测定。

2.根据权利要求1所述的一种高效检测水产品中头孢菌素残留量的方法，其特征在于，多壁碳纳米管固相萃取柱的制备方法为：称取2g多壁碳纳米管粉末于500 mL单口烧瓶中，加入50 mL浓硫酸和100 mL浓硝酸，超声振荡1h，静置后除去上层液，固体物反复用纯水洗至中性，80℃干燥后研磨成细粉末；装柱前，分别用纯水、甲醇清洗6mL的聚丙烯SPE柱空管和20 μm聚乙烯柱筛板，待小柱和筛板干燥后，先用筛板封住SPE柱底部，再称取45-80mg多壁碳纳米管于小柱中，垫上柱筛板压实，通过调节上筛板向下压紧程度来控制多壁碳纳米管填料厚度在0.6 cm；填装好的多壁碳纳米管SPE柱装于密封袋中，使用前使用前用5 mL甲醇、5 mL水和5 mL磷酸盐缓冲液活化。

3.根据权利要求1所述的一种高效检测水产品中头孢菌素残留量的方法，其特征在于，所述提取溶剂为乙腈-水溶液。

4.根据权利要求2所述的一种高效检测水产品中头孢菌素残留量的方法，其特征在于，多壁纳米碳管在放入单口烧瓶前，将多壁碳纳米管与浓度为65-75wt%的乳酸溶液混合均匀后加热搅拌，其中所述多壁碳纳米管与乳酸溶液的质量比为100:4-6，加热温度为80-95℃，加热时间40-60min；在加热搅拌过程中向反应液逐渐加入质量为所述多壁碳纳米管20-25%的浓度为30wt%的双氧水溶液；在加热搅拌结束后调节pH至中性，最后真空干燥。