[发明专利]检测副猪嗜血杆菌的交叉引物扩增引物组、试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种检测副猪嗜血杆菌的交叉引物扩增引物组、试剂盒及应用。该引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1～6所示的引物组；试剂盒包括上述的引物组和核酸试纸条；该试剂盒的使用方法如下：首先配制交叉引物扩增反应体系；恒温反应所得产物用核酸检测试纸条检测后直接进行判读：阳性结果为出现两条条带，一条位于检测区内，另一条位于质控区内。该试剂盒操作简单、成本低廉，反应结果易于观察，特异性好，非常适用于出口检疫、食品卫生以及畜牧养殖场的现场检测，易于大范围推广应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及一种副猪嗜血杆菌的交叉引物扩增快速检测试剂盒及应用。

背景技术

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是猪上呼吸道的一种常在机会致病菌，可在特定的条件下侵入机体，引起以浆液性、纤维素性多发性浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热及高死亡率为特征的传染性疾病，尤其对早期断奶仔猪的危害较大。随着规模化养猪业的发展，副猪嗜血杆菌病对养猪业的危害范围也正在扩大，给养猪业带来了巨大经济损失。

虽然副猪嗜血杆菌病一般通过疫苗接种和抗生素治疗进行控制，但准确的病原诊断却是对该病进行控制与净化的重要前提。目前，细菌分离仍是鉴定副猪嗜血杆菌的标准方法，但由于副猪嗜血杆菌具有娇嫩、生长缓慢、对生长条件的要求较高等特点，导致许多实验室很难掌握副猪嗜血杆菌的分离培养技术。因此，为了克服这个难题，针对病原核酸扩增的分子诊断方法已被研究和应用。Angen等(Angen,O.and S.Oliveira,et al.(2007).Development of an improved species specific PCR test for detection ofHaemophilus parasuis.Vet Microbiol 119(2-4):266-76.)在2006年建立的副猪嗜血杆菌PCR检测技术虽然能够快速的检测出副猪嗜血杆菌，但是该方法的敏感性相对不足。另外，PCR检测技术在扩增过程中需要昂贵的热循环功能仪与熟练的操作人员，妨碍该技术在兽医基层进行广泛的应用与推广。

发明内容

有鉴于此，本发明针对上述的问题，提供了一种副猪嗜血杆菌的交叉引物扩增快速检测试剂盒及应用，该试剂盒具有高特异性、高敏感性、可视化、操作方法简单的特点。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种检测副猪嗜血杆菌的交叉引物扩增引物组，由外部引物F3、外部引物B3、置换引物F1、置换引物F2、交叉引物CPR和探针Probe组成；

外部引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

外部引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

交叉引物CPR的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

置换引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

置换引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

探针Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

进一步地，置换引物F1的5’末端标记生物素Biotin；探针Probe的3’末端标记Fitc。

本发明还公开了一种检测副猪嗜血杆菌的交叉引物扩增试剂盒，包括上述的检测副猪嗜血杆菌的交叉引物扩增引物组和核酸试纸条。

进一步地，核酸检测试纸条为通用型核酸检测试纸条。

进一步地，该试剂盒还包括全封闭式靶核酸扩增物快速检测装置，该全封闭式靶核酸扩增物快速检测装置为将通用型核酸检测试纸条置入一个掌上塑料检测装置内得到。