[发明专利]浮萍活体原生质体制备方法

权利要求书

1.一种浮萍活体原生质体制备方法，其特征在于，按照下述步骤进行：

步骤1，调整Datko培养基的PH至5～6，于95～105kPa、120～125℃下进行高压灭菌；所述Datko培养基由水和下述浓度的化合物组成：

步骤2，采集浮萍，将浮萍培养于步骤1所述的Datko培养基上，每周继代1～2次，得到浮萍植株；其中，培养条件为：温度18～25℃，光周期16～18小时/天，光强95～97μmol m^-2s^-1；

步骤3，在25～28℃下将步骤2中所述浮萍植株放入甘露醇溶液中至该浮萍植株发生质壁分离；其中，所述甘露醇溶液中甘露醇的体积浓度为10～13％；

步骤4，在酶解温度为23～27℃的条件下，用组织酶解液在黑暗条件下酶解步骤3所得的浮萍植株25～30min，每间隔10～15min吹打混匀一次，得到悬浮的浮萍活体原生质体；所述组织酶解液由去离子水和下述浓度的化合物组成：

2.根据权利要求1所述的浮萍活体原生质体制备方法，其特征在于，在所述步骤1中，高压灭菌至少20分钟。

3.根据权利要求1所述的浮萍活体原生质体制备方法，其特征在于，在所述步骤3中，将步骤2中所述浮萍植株放入甘露醇溶液中0.5～2小时。

4.根据权利要求1所述的浮萍活体原生质体制备方法，其特征在于，在所述步骤1之前，制备Datko培养基母液，通过对所述Datko培养基母液进行稀释得到所述Datko培养基。

5.根据权利要求4所述的浮萍活体原生质体制备方法，其特征在于，将所述Datko培养基母液与水按照体积比为(2～3)：1000的比例进行混合，得到所述Datko培养基。

6.根据权利要求1所述的浮萍活体原生质体制备方法，其特征在于，在所述步骤4之后，对所述浮萍活体原生质体清洗2～3次。

7.根据权利要求6所述的浮萍活体原生质体制备方法，其特征在于，通过离心对所述浮萍活体原生质体进行清洗：用20～25℃的A液体垂直打入浮萍活体原生质体所在离心管，以使所述浮萍活体原生质体悬浮，进行离心，离心后移除上层清液；所述A液由去离子水和下述化合物组成：

8.根据权利要求7所述的浮萍活体原生质体制备方法，其特征在于，相对离心力为1800～2000×g。

9.根据权利要求8所述的浮萍活体原生质体制备方法，其特征在于，每次清洗2～3min。