[发明专利]一种制备骨诱导成骨制剂的方法

权利要求书

1.一种制备骨诱导成骨制剂的方法，该方法包括如下步骤：1.对外源骨基质进行脱钙处理；2.然后再对经过脱钙处理的骨基质进行去除蛋白；3.让外源骨形态发生蛋白与经过步骤2处理的骨基质进行混合，让外源蛋白与估计值形诱导成骨制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的骨骼为人骨骼，对人骨进行脱钙处理的步骤如下：(1)、将收集的人骨入清水容器内，在摄氏5度以下条件储存；(2)、用1.2％d次氯酸钠浸泡消毒原料骨骼，时间为30-55分钟、温度为摄氏35-40摄氏度；(3)、去除骨骼上无使用价值的部分；(4)、用机械方法将骨骼组织粉碎成颗粒剂或者冻干粉，平均粒径为0.10-0.25毫米；(5)、再用1.2％的次氯酸钠浸泡消毒粉碎成颗粒剂或者冻干粉的骨骼组织，浸泡消毒时间为10-45分钟、温度为摄氏35-40度；(6)、将骨骼组织颗粒剂或者冻干粉置入到0.65-0.72当量盐酸液浸泡，在38摄氏度下浸泡16-20小时完成脱钙；(7)、低温干燥，获得脱钙的骨基质粉末或者颗粒。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，对步骤已经脱钙骨骼处理后的骨骼基质进行提取蛋白的处理的方法如下：a、首先把处理的脱钙骨骼质除去双氧水，用灭菌水冲洗多次直至无双氧水存在；获得骨骼基质粉末；然后让脱钙的骨骼粉末1000克悬浮在2升PH＝7.2的磷酸盐缓冲液中；b、让酶解锅内温度调至48-50℃，pH值调至8.5时加入胰酶O.35g；酶的反应时间均为12-56小时,进行蛋白的降解处理；处理结束后，进行离心分离上清液和沉淀，去除上清液，保留沉淀，并进行干燥，获得脱钙、脱蛋白的骨骼粉末颗粒。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，然后让脱钙，脱蛋白的骨骼粉末悬浮在PH＝7.2的磷酸盐缓冲液中。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，把外源BMP用PH＝7.2的磷酸盐缓冲液溶解，然后与包含脱钙，脱蛋白的骨骼粉的磷酸盐缓冲液两者混合在一起，放到搅拌机器上进行匀速缓慢搅拌，搅拌的速率为20-120转/分钟进行搅拌，同时处于变温的水浴锅内。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，水浴锅的温度顺次如下：26摄氏度，8小时；30摄氏度；6小时；28摄氏度；8小时，28摄氏度，12小时；然后保持在恒温30摄氏度下进行继续搅拌，每隔3小时测量一次混合溶液中BMP蛋白的浓度，直到浓度下降到初始BMP浓度的5％－6％以下停止搅拌。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，停止搅拌后，通过离心，去掉上清液体，剩下的粉末进行过滤，然后经过低温干燥。

8.根据权利要求1-7之一所述的方法，其中，所述的外源BMP蛋白为BMP-2、BMP-1、BMP-3BMP-4、BMP-5、BMP-6或BMP-7中的一种或者几种。

9.根据权利要求1-8所述的方法，其中，在诱导成骨制剂中包括有维生素B2。

10.一种如权利要求1-8之一方法制备的促进骨骼增长的颗粒剂或者冻干粉制剂，其中，该实际的颗粒剂或者冻干粉细小均匀，形态一致，呈圆棒状，长度约为122—240nm，直径约为60一110nm；其中，促进骨骼增长的颗粒剂或者冻干粉制剂中还包括有维生素B2。