[发明专利]一种红心柯初代培养芽诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及红心柯无性繁殖技术，尤其是一种红心柯初代培养芽诱导方法。

背景技术

红心柯（Lithocarpus carolinae(Skan)Rehd），系壳斗科（Fagaceae）柯属（Lithocarpus）乔木，高约20米，胸径40厘米，顶部芽鳞三角状长披针形，当年枝有纵棱，干后暗黑褐色，二年生枝有散生的皮孔，枝、芽鳞、叶均无毛。叶厚纸质，长圆形，稀倒卵状长椭圆形，长13-18厘米，宽4-6厘米，顶部尾状短尖，基部楔尖，中脉在叶面微凸起，或上段平坦，侧脉每边15-20条，直达叶缘的齿端，或近叶缘处急弯向上，渐纤细而隐没，在脉腋处有星状小丛毛，叶缘下段全缘，上段钻齿状，两面同色，干后暗褐色；叶柄长1.5-2厘米。壳斗每3或5个一簇，成熟壳斗浅盘状，高10-15毫米，宽30-40毫米，基部有甚短的柄，壳壁上部较薄，下部厚约2.5毫米，包着坚果下半部，干后暗褐色，稍油润，小苞片宽三角形，基部的呈菱形，中央脊肋状纵向增厚，紧贴，覆瓦状排列；坚果扁圆形，高24-30毫米，宽40-45毫米，果壁厚6-10毫米，顶部平坦，但中央稍凹陷，暗褐色，无毛，稍有光泽，果脐深2-4毫米，口径25-30毫米，凹凸不平，中央部分略隆起。果期9-10月。红心柯产云南南部至东南部（墨江、屏边、金平）。生于海拔1500-2000米山地杂木林中。

目前，红心柯资源仍处于野生分布状态，但随着保持植物多样性的需求，规模化人工栽培红心柯资源势在必行。组织培养技术是一种快速无性繁殖技术，选择红心柯优良家系或者无性系为材料，通过组织培养方法繁殖苗木，既可以满足生产上的数量要求，又可保持母本性状。组织培养过程中，初代培养是制约组织培养顺利进行的关键步骤，其中涉及了外植体的获取、外植体的消毒、培养基选择以及培养过程中培养体褐变、苗木玻璃化等重要问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能克服芽诱导过程中外植体褐变以及玻璃化等问题，提高芽诱导率，出芽指数以及萌芽生长状况，获取数量多、质量好的萌芽，从而满足增殖培养的需要，促进红心柯组织培养快速繁殖体系的建立的红心柯初代培养芽诱导方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种红心柯初代培养芽诱导方法，采用红心柯基部萌条为外植体，通过外植体无菌处理后，将外植体接种于优质初代培养芽诱导培养基上，置于适宜的温度、湿度和光照强度条件下进行培养，诱导芽的萌发；其操作步骤为，

（1）外植体选择：选择红心柯基部萌发的半木质化的萌条为外植体；

（2）外植体消毒及接种：将红心柯萌条经过洗洁精清洗，流水冲洗和化学试剂处理消毒后，剪切成茎段接入芽诱导培养基中；

（3）芽诱导培养：将接种后的外植体置于适宜室内条件下培养。

以上所述的芽诱导培养基其原料含量为：1/3～1/2改良WPM培养基+6-BA 1.0～2.0mg/L+活性炭10mg/L+乳糖5.0g/L+蔗糖20.0g/L。

以上所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH₄NO₃ 850 mg/L，CaCl₂·2H₂O 192 mg/L，MgSO₄·7H₂0 300 mg/L，KH₂PO₄ 250 mg/L，Ca(NO₃)₂·4H₂O 180 mg/L，KI 0.83 mg/L，H₃BO₃ 6.2 mg/L，MnSO₄·H₂O 22.4 mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25 mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.25 mg/L，Na₂·EDTA 37.3 mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.8 mg/L，肌醇85 mg/L，烟酸1.0 mg/L，盐酸吡哆醇1.0 mg/L，盐酸硫胺素2.0 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L。

以上所述的萌条是长为6~9cm、直径0.2～0.4 cm的半木质化的萌条。