[发明专利]一种基于Cpf1的DNA体外拼接方法

权利要求书

1.一种核酸构建物，其特征在于，所述的核酸构建物包括：

(a)第一核酸构建物，所述第一核酸构建物为双链DNA构建物，并且所述第一核酸构建物的序列中含有至少一个式I所示的Cpf1识别切割元件；

D1-D2-D3 (I)

式中，

D1为前间区序列邻近基序PAM；

D2为长度N2个核苷酸的Cpf1识别区，其中，N2为正整数17；

D3为长度为N3个核苷酸的Cpf1切割区，其中，N3为5或8；

以及

(b)第二核酸构建物，所述第二核酸构建物为RNA构建物，并且所述所述第二核酸构建物为结构如式II所示的crRNA元件；

R1-R2-R3 (II)

式中，

R1为5'的发夹区；

R2为长度M2个核苷酸的、与D2互补的Cpf1识别引导区，其中M2为正整数17；

R3为无。

2.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述的核酸构建物还包括：

(c)第三核酸构建物，所述第三核酸构建物为DNA构建物，并且所述第三核酸构建物的序列中含有至少一个式III所示的Cpf1识别切割元件；

E1-E2-E3 (III)

式中，

E1为前间区序列邻近基序PAM；

E2为长度N2个核苷酸的Cpf1识别区，其中，N2为正整数17；

E3为长度为N3个核苷酸的Cpf1切割区，其中，N3为5或8。

3.如权利要求2所述的核酸构建物，其特征在于，所述的构建物还包括：

(d)第四核酸构建物，所述第四核酸构建物为RNA构建物，并且所述所述第四核酸构建物为结构如式IV所示的crRNA元件；

S1-S2-S3 (IV)

式中，

S1为5'的发夹区；

S2为长度M2个核苷酸的、与E2互补的Cpf1识别引导区，其中M2为正整数17；

S3为无。

4.如权利要求3所述的核酸构建物，其特征在于，所述的式I所示的Cpf1识别切割元件与式III所示的Cpf1识别切割元件是相同的；和/或

所述的如式II所示的crRNA元件与式IV所示的crRNA元件是相同的。

5.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述的第一核酸构建物中含有2个或多个式I所示的Cpf1识别切割元件；和/或

所述的第三核酸构建物中含有2个或多个式III所示的Cpf1识别切割元件。

6.如权利要求2所述的核酸构建物，其特征在于，所述的第三核酸构建物中含有2个或多个式I所示的Cpf1识别切割元件。

7.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述的第一核酸构建物包括表达载体、核酸片段、质粒、染色体片段。

8.如权利要求2所述的核酸构建物，其特征在于，所述的第三核酸构建物包括核酸片段、质粒。

9.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述的第一核酸构建物包括一种或多种第一核酸构建物。

10.如权利要求2所述的核酸构建物，其特征在于，所述的第三核酸构建物包括一种或多种第三核酸构建物。

11.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述的R1的长度为M1个核苷酸，M1为20-32的正整数。

12.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，N2＝M2。

13.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，N2为17。