[发明专利]一种高效分离制备单一分子量透明质酸寡糖的方法有效
| 申请号： | 201610865128.3 | 申请日： | 2016-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN106399428B | 公开（公告）日： | 2019-08-06 |
| 发明（设计）人： | 康振;陈坚;堵国成;原攀红 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12P19/26 | 分类号： | C12P19/26;C12P19/14 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 透明质酸寡糖 高效分离 生物工程技术领域 寡聚透明质酸 分离和纯化 催化降解 生物酶法 透明质酸 寡聚糖 规模化 衍生体 寡糖 | ||
1.一种制备单一分子量透明质酸寡糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以透明质酸酶水解透明质酸得到透明质酸寡糖混合物；
(2)使用离子交换柱HiPrep Q FF 16/10对透明质酸寡糖混合物进行分离纯化；
所述步骤(2)中，先使用10倍柱体积的缓冲液A冲洗柱子，再通过10倍柱体积的洗脱剂，以2mL/min的流速对色谱柱进行线性洗脱；所述洗脱剂由缓冲液A、缓冲液B组成，其中NaCl浓度于100min内从0提高到0.2mol/L，收集、合并同一峰对应的洗脱液；所述缓冲液A是50mmol/L的pH 8.5的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，所述缓冲液B是pH 8.5的0.5mol/L的NaCl缓冲液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，缓冲液A的制备是称取3.75g甘氨酸溶解于500mL去离子水，用5M NaOH溶液调节pH至8.5,加去离子水定容至1L；缓冲液B的制备是称取29.22gNaCl溶于缓冲液A中，并定容至1L。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)是在发酵罐中加入900mL的水，并加入透明质酸酶3.5×107U和透明质酸40g，并加水至1L，在45℃、转速为700rpm条件下反应，反应11小时后高温灭活。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透明质酸酶是水蛭来源的透明质酸酶。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透明质酸的分子量是1.21×106Da。
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