[发明专利]功能化长春花碱脂质体及其应用

说明书

本发明公开了功能化长春花碱脂质体及其应用。本发明提供了一种长春花碱脂质体，为用功能化材料转铁蛋白受体结合肽‑聚乙二醇‑二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和硬脂基八聚精氨酸修饰脂质体，得到修饰后脂质体，再将长春花碱包载到所述修饰后脂质体中，得到功能化长春花碱脂质体。本发明的实验证明，本发明合成了一种功能化材料转铁蛋白受体结合肽‑聚乙二醇‑二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(NHS‑PEG₂₀₀₀‑DSPE)，并用其与靶向材料硬脂基八聚精氨酸(stearyl‑R₈)修饰长春花碱脂质体，得到一种能够跨越血脑屏障并杀伤脑胶质瘤及其干细胞的功能化长春花碱脂质体。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种功能化长春花碱脂质体及其应用。

背景技术

长春花碱(vinblastine，VLB)由加拿大西安大略大学科学家Robert Noble和Charles Thomas于1958年首次从夹竹桃科植物长春花中提取分离得到，它是一种双吲哚型生物碱，具有抗肿瘤活性。长春花碱的结构式如图1所示，分子式为C₄₆H₅₈N₄O₉，分子量为810.97，常溶于硫酸盐，不溶于水，为白色或类白色结晶性粉末。

转铁蛋白受体结合肽TfR-T₁₂是序列为THRPPMWSPVWP的多肽，包含12个氨基酸(Thr-His-Arg-Pro-Pro-Met-Trp-Ser-Pro-Val-Trp-Pro)，易溶于水和甲醇，分子量为1490.8。TfR-T₁₂多肽能与人转铁蛋白受体(transferrin receptor，TfR)特异性结合，并且竞争结合实验显示其结合位点与转铁蛋白(transferrin，Tf)的结合位点不同，这使得TfR-T₁₂在体内与转铁蛋白受体结合时不会受到转铁蛋白的干扰。由于血脑屏障和肿瘤细胞上高表达转铁蛋白受体，因此TfR-T₁₂在脑部靶向药物递送系统中有潜在应用价值。

硬脂基八聚精氨酸(stearylated octaarginine，Stearyl-R₈)是由八个精氨酸和硬脂基(stearyl)合成连接而得的功能材料，由Shiroh Futaki等首先合成得到。八聚精氨酸能帮助质粒DNA进入细胞进行转染，在与硬脂基结合后转染效率显著增加。Stearyl-R₈能帮助材料进入细胞主要因为精氨酸具有丰富的阳离子中心，而大多数细胞(尤其是肿瘤细胞)和细胞器表面呈负电性，因此具有靶向肿瘤细胞和亚细胞器的功能，同时由于硬脂基的存在，可插入到脂质体的磷脂双分子层上，帮助脂质体靶向肿瘤部位。

二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG₂₀₀₀)是一种用于长循环脂质体制备的材料，1992年由Maruyama K等报导了该材料修饰的大单层脂质体在血液系统中循环时间的得到延长。经过NHS基团活化的DSPE-PEG₂₀₀₀为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-N-琥珀酰亚胺(NHS-PEG₂₀₀₀-DSPE)，易与多肽上的氨基反应，在反应过程中脱去N-羟基琥珀酰亚胺，生成酰胺键，易于操作。

脑胶质瘤是一种重大的脑部疾病，手术治疗难度大，放射治疗副作用多，且手术治疗或放射治疗后仍会残存少量的脑胶质瘤细胞及其干细胞。常规的化学治疗中，化疗药物难以跨越血脑屏障，而少量能跨越血脑屏障的药物由于脑胶质瘤干细胞具有耐药性，也难以将其清除干净，导致脑胶质瘤的复发。因此，如何帮助化疗药物跨越血脑屏障、在杀伤脑胶质瘤的同时清除残存的脑胶质瘤及其干细胞是仍待解决的重要科学问题。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种脂质体或者长春花碱脂质体。

本发明提供的脂质体经转铁蛋白受体结合肽-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和硬脂基八聚精氨酸修饰；