[发明专利]含猪肺炎支原体抗原的融合蛋白、疫苗组合物与应用

说明书

本发明涉及一种融合蛋白，该融合蛋白包括在序列上从N端到C端的产毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基和猪肺炎支原体抗原蛋白。本发明还涉及该融合蛋白制备的疫苗组合物及其应用。本发明的疫苗组合物在免疫一次后，能达到商用灭活疫苗的免疫效果或更优的免疫效果。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体地说涉及含猪肺炎支原体抗原的融合蛋白、疫苗组合与应用。

背景技术

猪支原体肺炎(Mycoplasma pneumonia of swine，MPS)是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)引起的一种慢性、接触性传染病,是一种重要的免疫抑制性疾病,也是猪呼吸道疾病综合征(Porcine respiratory disease complex,PRDC)的重要病原之一。该病长期危害养猪业，并广泛分布于世界各国。临床上以咳嗽、气喘和肺部典型的“虾肉”样病变为特征，发病率高，死亡率低。

目前对于猪支原体肺炎控制主要依赖于疫苗免疫和抗生素的应用。虽然抗生素应用在治疗气喘病方面有一定的效果，但国家对于抗生素滥用日益重视，管理日益严格，因此，疫苗免疫将是未来有效预防该病的一种有效方法。目前国内应用的疫苗主要以弱毒疫苗和灭活疫苗为主，国外疫苗主要以灭活苗为主，包括勃林格、硕腾、默克等公司在内的灭活苗，在世界范围内应用广泛。在许多国家，超过70％的猪群接种猪支原体肺炎灭活苗，能够改善猪群的日增重和饲料转化率，并在群体感染水平整体降低死亡率。虽然疫苗被广泛应用，但其效果仍存在一定问题，最近研究表明，灭活疫苗开发完全基于佐剂化的全细胞制剂或膜制剂，免疫效果不是完全有效的，疫苗免疫虽然能够降低肺损伤，但是不能阻止猪肺炎支原体在肺内的增殖与传播。另一方面国内目前对于猪肺炎支原体的培养以及分离技术并不十分完善，猪肺炎支原体培养难、生长周期较长，导致传统疫苗生产成本较高。

现有的猪肺炎支原体灭活疫苗往往要免疫两次才能达到好的效果，加强免疫过程给使用者带来了经济和程序上的负担。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种融合蛋白，以及含该融合蛋白的疫苗组合物与应用。该疫苗组合物既能产生细胞免疫，又能产生体液免疫，能获得较好的免疫保护。

本发明涉及一种融合蛋白，所述的融合蛋白包括：产毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基-LTB和猪肺炎支原体免疫原性蛋白。

本发明还涉及含有所述融合蛋白的疫苗组合物，所述疫苗组合物能对猪产生有效的保护，效果与现有技术中的商用灭活疫苗相当或更优。

本发明还涉及一种制备所述猪肺炎支原体融合蛋白的方法，所述方法包括：通过基因工程手段分别获得所述的LTB基因、所述的猪肺炎支原体免疫原性蛋白基因，将两类基因重组到表达载体后，进行表达，分离，纯化。

本发明还涉及所述疫苗组合物在制备预防和/或治疗猪支原体肺炎相关疾病的药物中应用。

本发明的疫苗组合物可通过基因工程手段对其组分进行大量重组表达，不仅耗时短，还可便于大规模生产；所述疫苗组合物既能产生细胞免疫，又能产生体液免疫，能获得较好的免疫保护；所述疫苗组合物不含核酸，不仅不存在灭活不彻底造成的安全隐患，有利于疾病的净化；本发明的疫苗组合物仅免疫一次即可产生与现有技术中的商用灭活疫苗相当或更优的保护效果。

序列表中：

SEQ ID No.1为产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基核苷酸序列；

SEQ ID No.2为产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基氨基酸序列；

SEQ ID No.3为P97R1蛋白的核苷酸序列；

SEQ ID No.4为P97R1蛋白的氨基酸序列；

SEQ ID No.5为NrdFR2蛋白的核苷酸序列；