[发明专利]低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品中非食用色素检测技术领域，尤其涉及一种低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法。

背景技术

碱性橙II和碱性嫩黄O均为芳香胺类碱性工业染料，主要用于麻、纸、皮革、草编织品、人造丝等的染色。碱性橙II和碱性嫩黄O对皮肤黏膜有轻度刺激，可引起结膜炎、皮炎和上呼吸道刺激症状，人体接触或吸食均会引起中毒，且很难降解代谢，这两种物质均具有致癌和致突变性质。根据GB 2760食品添加剂适用卫生标准规定，碱性橙II和碱性嫩黄O都严禁作为食品添加剂使用。由于在中性或偏碱性条件下，碱性橙II和碱性嫩黄O与蛋白质吸附较牢固，不易褪色，比其他水溶性染料如柠檬黄、日落黄等更易于在食品中染色，因此，一些不法商贩常将其用于食品的染色，使产品色泽鲜亮，欺骗消费者，危害消费者的身体健康。

GB 35/T 897-2009《食品中碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红T含量的测定》中规定了碱性橙II和碱性嫩黄O的检测方法，该方法存在前处理过程繁琐复杂、有机溶剂使用量较多、耗时长等多方面的缺陷，而且该方法主要是针对固体样品，对于调味油这类基质和杂质均比较复杂的样品并不适用。

黄曲霉毒素(AFT)是公认的天然强致癌物质之一，其中以黄曲霉毒素B₁(AFTB1)毒性最大，它们常存在于各种动物饲料和人类食品中。我国真菌毒素限量标准GB 2761《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》针对不同食品品种规定了黄曲霉毒素B₁的限量指标。

GB/T 18979-2003《食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》和GB/T 5009.23-2006《食品中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂的测定》中均规定了黄曲霉毒素B₁的检测方法，该方法存在前处理过程繁琐复杂、有机溶剂使用量较多、耗时长等多方面的缺陷。

发明内容

针对以上技术问题，本发明公开了一种低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，该方法操作简单，检测快速，成本低廉。

对此，本发明采用的技术方案为：

一种低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其包括以下步骤：

步骤S1：配制碱性橙II和碱性嫩黄O的混合标准液，并稀释成不同浓度的标准工作液，分别采用液相色谱仪进行检测得到不同浓度的碱性橙II和碱性嫩黄O标准工作液的液相色谱图，根据液相色谱图的峰面积和对应的浓度制作碱性橙II和碱性嫩黄O的校正曲线；配制黄曲霉毒素B1标准液，并分别稀释成不同浓度的黄曲霉毒素B1的标准工作液，分别采用液相色谱仪进行检测得到不同浓度黄曲霉毒素B1标准工作液的液相色谱图，根据液相色谱图的峰面积和对应的浓度制作黄曲霉毒素B1的校正曲线；

步骤S2：制备低共熔溶剂，所述低共熔溶剂包括氢键受体化合物和氢键供体化合物；

步骤S3：称取调味油样品，加入步骤S2中所述低共熔溶剂和烷烃试剂，进行震荡萃取，离心后去除上面的油层，剩余物采用液相色谱仪进行检测得到样品的色谱图；其中，所述低共熔溶剂和烷烃试剂的体积比大于0.0025；其中优选的，所述剩余物用烷烃洗涤后采用液相色谱仪进行检测，洗涤的目的是为了除油除杂更彻底；

步骤S4：将样品的色谱图与碱性橙II和碱性嫩黄O标准工作液的液相色谱图、以及黄曲霉毒素B1标准工作液的液相色谱图进行比较确定是否含有碱性橙II、碱性嫩黄O和黄曲霉毒素B1，如果确定含有碱性橙II和碱性嫩黄O，再根据样品的色谱图峰面积所对应的标准曲线上的浓度确定样品中碱性橙II和碱性嫩黄O的含量；如果确定含有黄曲霉毒素B1，再根据样品的色谱图峰面积所对应的标准曲线上的浓度确定样品中黄曲霉毒素B1的含量。

采用此技术方案，利用低共熔溶剂提取调味油样品中的碱性橙II和碱性嫩黄O，利用烷烃类试剂除去复杂的基质可达到样品净化的目的，再将低共熔溶剂上机检测，实现了快速检测，步骤简单，无需复杂的样品前处理过程，减少了溶剂的使用，同时又除去了调味油中复杂基质的干扰，保证了检测结果的准确性。