[发明专利]具有卵巢肿瘤靶向D构型多肽的基因递释系统

说明书

本发明提供一种具有卵巢肿瘤靶向D构型多肽的基因递释系统，将L型多肽YTRDLVYKDPAR PKIQKTCTF逆序并以D构型的氨基酸替代后得到_D(FTCTKQIKPRAPDKYVLDRTY)序列多肽，作为靶向分子，利用其与FSHR的高亲和性，将基因靶向输送至卵巢癌细胞处；并且，将_D(FTCTKQIKPR APDKYVLDRTY)修饰到PEI‑PEG表面制得_D(FTCTKQIKPRAPDKYVLDRTY)‑PEG‑PEI（D‑FP21‑PP）基因载体，所述基因载体包载治疗基因Gro‑ɑshRNA；可显著提高基因转染效率，并可以显著提高裸鼠皮下瘤的抑瘤率。

技术领域

本发明涉及D构型多肽及基因递释系统，特别是具有与卵巢癌细胞高活性结合，具有卵巢癌靶向的D型多肽及其修饰的基因递释系统。

背景技术

卵巢癌的死亡率高居妇女癌症死亡率的前五位，并居妇科恶性肿瘤的首位。大多数卵巢癌患者在诊断时已处于晚期，而晚期卵巢癌的治疗一直是一个很棘手的问题。尽管手术的改进、新药物的上市、新化疗方案的推出在一定程度上提高治疗效果，但5年生存率仍未见明显提高。化疗是晚期卵巢癌治疗的重要手段，但是多数晚期患者在治疗后复发或耐药，导致治疗失败。其主要原因是药物生物分布不均，药物无法在肿瘤组织得到有效浓度聚集，对正常的组织及器官有极大的毒副作用。因此，有必要探寻新的卵巢癌治疗手段。

靶向治疗使肿瘤治疗进入一个新的时代。常见的靶向治疗递药系统有纳米材料载体、脂质体材料载体及病毒载体。其各有优缺点。但其中以线性聚乙烯亚胺（PEI）为载体材料包裹药物、基因形成的纳米复合物对肿瘤进行靶向治疗最为常见。其有很高的药物承载性、稳定性及转染效率。聚乙二醇(PEG)对PEI的修饰降低了其毒性作用，同时可以连接相应的靶向配体（如：多肽、抗体等），通过受体介导内吞作用，增加靶细胞对载药系统的特异性摄取，选择性的递送更多药物进入肿瘤病灶，最终使得相同剂量药物的疗效最大化，而毒副作用最小化。

在另一方面，选择一个有高特异性及结合能力的靶向配体亦是靶向治疗的关键。卵巢是卵泡刺激激素（FSH）的靶器官,FSH通过卵泡刺激激素受体（FSHR）刺激卵巢中卵泡的生长。FSHR 可以在卵巢表面上皮及大部分卵巢癌组织及细胞系中找到，并且FSHR在人体中的分布比较局限，大多集中在生殖系统。目前，FSHR结合位点已经被确认，集中在FSHR重链的1-15, 33-53, 51 -65, 81-95氨基酸处。我们前期研究设计了与其位点对应结合的多肽片段，经过实验验证后表明在33-55氨基酸处的多肽与FSHR的结合力最强。其序列结构为L-FP21(YTRDLVYKDPARPKIQKTCTF)。故选择此多肽作为纳米递药系统的靶向配体。实验表明FSHR结合片段对纳米材料的修饰能够有效提高其对所包载的化疗药物或基因药物的特异性递送能力，FSHR是一种较为适宜的卵巢癌治疗靶位点。

目前，越来越多的多肽配体应用在药物靶向治疗领域。但自然的多肽在人血液中并不稳定，非常容易被血清中的蛋白酶降解，这影响了多肽配体的靶向效果。

目前，尚未见到关于含有序列多肽修饰的非病毒基因递释系统及其在体内外转染效率评价以及抗卵巢癌作用的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有卵巢肿瘤靶向D构型多肽的基因递释系统，将L型多肽YTRDLVYKDPARPKIQKTCTF逆序并以D构型的氨基酸替代后得到_D(FTCTKQIKPRAPDKYVLDRTY) 序列多肽，作为靶向分子，利用其与FSHR的高亲和性，将基因靶向输送至卵巢癌细胞处；并且，将_D(FTCTKQIKPRAPDKYVLDRTY)修饰到PEI-PEG表面制得_D(FTCTKQIKPRAPDKYVLDRTY)-PEG-PEI（D-FP21-PP）基因载体，所述基因载体包载治疗基因Gro-ɑ shRNA；可以显著提高裸鼠皮下瘤的抑瘤率。