[发明专利]番茄红素顺式异构体在制备卵巢癌治疗药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及番茄红素异构体的一种新用途，具体涉及番茄红素顺式异构体在制备卵巢癌HO-8910细胞增殖和凋亡影响药物中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

番茄红素(Lycopene，Lyp)具有猝灭活性氧、消除人体自由基，预防心脏病、减缓动脉粥样硬化、预防多种癌症、抗老化、保护皮肤等生理功能。流行病学研究表明，血液中Lyp浓度与前列腺癌、食道癌、胰腺癌、胃肠癌、乳腺癌、皮肤癌、膀胱癌等的发生率呈负相关。许多体外细胞实验都证实了这一点，Lyp对食管癌细胞系(Eca9706)有抑制生长作用，对人前列腺癌PC-3细胞和乳腺癌MDA-MB-231细胞均有抑制增殖和诱导凋亡作用，对宫颈癌Hela细胞及小鼠前胃组织癌变也有一定抑制作用。但Lyp对具高发病率的卵巢癌是否有抑制作用在本发明人研究论文见刊前尚未见报道。

Lyp可降低乳腺癌细胞丝裂原的活性，抑制细胞周期停滞于G1期至S期，Lyp可以增强细胞间隙连接通讯(GJIC)功能，促进吞噬细胞、淋巴细胞间的相互作用，通过分泌细胞活化因子活化细胞，最终表现为对吞噬能力及淋巴细胞转化的促进，增强免疫功能进而诱导肿瘤细胞凋亡。2012年NATUER发表的一份研究报告报道：乳腺癌遗传分析显示其致癌原因与卵巢癌相似。

发明内容

本发明的目的在于提供番茄红素顺式异构体在制备卵巢癌治疗药物中的应用。

番茄红素结构式

番茄红素，分子式C₄₀H₅₆，相对分子质量536.85，是膳食中一种重要的类胡萝卜素，主要存在于番茄及其制品、西瓜、石榴、秋橄榄和紫色葡萄柚中。天然来源的番茄红素主要以全反式形式存在，是最稳定的结构。在人类血浆中，番茄红素含量为0.2-1.0μmol/L，主要以顺式构型存在，反式构型只占41％。国外研究证明，顺式番茄红素更容易被人体吸收，也具有更高的生物活性。

国内外关于番茄红素与癌的关系文献中，对顺、反异构体的作用差异研究尚未见报道。由此，发明人首次提出假说：由反式番茄红素可异构化得到的顺式番茄红素，且二者对人卵巢癌HO-8910细胞抑制增殖与诱导凋亡作用存在差异性。本发明中，运用细胞实验证实了上述假说，初步研究结果提示，含高比例顺式的Lyp体外抑制HO-8910细胞的作用比全反式Lyp更强一些，且二者浓度在10μg·mL^-1和20μg·mL^-1时，抑制率和凋亡率比较有显著性差异。

顺式番茄红素采用由全反式番茄红素异构化制备，参照Pierre Lambelet等的方法进行顺式化处理：称取购自的番茄红素粉末适量，用经膜过滤的乙酸乙酯溶液溶解，制成1mg·mL^-1的溶液，避光100℃水浴回流5h，在4℃条件下放置12h，过滤，去除结晶(I号药，全反式番茄红素)，滤液减压蒸发至干，得到红色针状晶体(II号药，顺式番茄红素粉末)。

番茄红素顺式异构体目前尚未用于制备药物，保健品的剂型为胶囊剂和片剂。

具体实施方式

1材料与方法

1.1实验材料

番茄红素粉末(纯度90％)(华北制药股份有限公司)

HO-8910细胞株(中南大学湘雅医院细胞中心)

四氮唑盐(Sigma公司)

0.4％台盼蓝(Gibco公司)

RPM-1640(Gibco公司)

新生小牛血清(杭州四季青)

多西他赛注射液(DOC，恒瑞医药)

二甲基亚砜(DMSO)

乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司)

1.2顺式番茄红素的合成与分离

参照Pierre Lambelet等的方法进行顺式化处理：称取购自华北制药公司的番茄红素粉末适量，用经膜过滤的乙酸乙酯溶液溶解，制成1mg·mL^-1的溶液，避光100℃水浴回流5h，在4℃条件下放置12h，过滤，去除结晶(I号药)，滤液减压蒸发至干，得到红色针状晶体(II号药)。

番茄红素油溶液的制备与紫外光谱扫描：按文献^[5]方法，分别称取I、II号药及番茄红素粉末各0.0200g置100mL量瓶中，各瓶先加入DMSO0.5ml，再加入葵花籽油稀释至刻度，摇匀，制成储备液。精密量取储备液1mL加葵花籽油定容至100mL量瓶中，摇匀，于200～600nm处扫描紫外吸收光谱。