[发明专利]一种马链球菌兽疫亚种及其制备透明质酸的生产工艺

说明书

技术领域

本发明涉及透明质酸生产技术领域，特别是涉及一种马链球菌兽疫亚种及用其制备透明质酸的生产工艺。

背景技术

目前微生物发酵法生产透明质酸采用的工艺发酵周期长，发酵工艺不能依据菌种特性进行，导致菌种活性不能被激发，透明质酸产率低，产品质量差。开发新的发酵用菌种，同时，依据菌种特性改善生产工艺来提高透明质酸的质量和产量，是本发明需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的就是针对上述存在的缺陷而提供一种马链球菌兽疫亚种及其制备透明质酸的生产工艺。本发明采用筛选出的新的马链球菌兽疫亚种，结合改进后的发酵技术，透明质酸产品产出率高，可达9.5g/L。发酵得到的透明质酸易于分离纯化，生产周期短。生产易于控制，适合工业化大规模生产，收率高，并且大大降低了生产成本。

本发明的一种马链球菌兽疫亚种及其制备透明质酸的生产工艺技术方案为，一种马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi subsp. zooepidemicus）DCS005，目前该马链球菌兽疫亚种在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，其保藏编号是：CGMCC No.12782，菌种的拉丁文名称是Streptococcus equi subsp. zooepidemicus，参据的微生物（株）：DCS005，保藏日期是2016年7月14日。

用所述的马链球菌兽疫亚种制备透明质酸的生产工艺，包括以下步骤：

（1）摇瓶种子液培养；

（2）菌种扩大培养；

（3）发酵，先通入无菌含氧空气发酵，再通入氮气继续发酵；

（4）提纯。

步骤（1）、（2）、（3）中的培养液包括按重量百分比的淀粉1%、蔗糖0.5%、牛肉膏0.5%、酵母粉0.5%、磷酸氢二钾0.02%、氢氧化钠0.05%，余量为水，pH7.0-7.3。

步骤（1）中，培养条件为：38.5℃培养12-16小时。

步骤（2）中，培养条件为温度38.5℃、pH7.0-7.3，培养时间为12-16小时。

步骤（2）中，罐压0.05MPa。

步骤（3）中，发酵罐罐压0.05MP。

步骤（3）具体为，通入无菌含氧空气37-40℃发酵18-32小时后，通入氮气39-45℃继续发酵，通入氮气阶段同时加入浓度为800g/L的葡萄糖300mL，发酵液pH每分钟下降幅度小于0.01时结束发酵，检测发酵液粘度，将发酵液压入沉淀罐中。

本发明的有益效果为：

本发明筛选出透明质酸产率高的菌种，结合改进的发酵技术，透明质酸产品产出率高，可达9.5g/L，生产周期短。本发明生产工艺简单，原辅料常见易得，生产易于控制，杂质含量更低，适合工业化大规模生产，收率高，并且大大降低了生产成本。

具体实施方式：

为了更好地理解本发明，下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案，但是本发明并不局限于此。

实施例１

一种马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi subsp. zooepidemicus）DCS005，目前该马链球菌兽疫亚种在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，其保藏编号是：CGMCC No.12782，菌种的拉丁文名称是Streptococcus equi subsp. zooepidemicus，参据的微生物（株）：DCS005，保藏日期是2016年7月14日。

用所述的马链球菌兽疫亚种制备透明质酸的生产工艺，包括以下步骤：

（1）摇瓶种子液培养；

（2）菌种扩大培养；

（3）发酵，先通入无菌含氧空气发酵，再通入氮气继续发酵；

（4）提纯。

步骤（1）、（2）、（3）中的培养液包括按重量百分比的淀粉1%、蔗糖0.5%、牛肉膏0.5%、酵母粉0.5%、磷酸氢二钾0.02%、氢氧化钠0.05%，余量为水，pH7.0-7.3。

步骤（1）中，培养条件为：38.5℃培养12-16小时。

步骤（2）中，培养条件为温度38.5℃、pH7.0-7.3，培养时间为12-16小时。

步骤（2）中，罐压0.05MPa。

步骤（3）中，发酵罐罐压0.05MP。