[发明专利]离子浓度极化效应ICP免疫检测侧向流层析纸条

说明书

技术领域

本发明涉及生命科学及医学检测领域，特别涉及一种离子浓度极化效应(Ion Concentration Polarization,ICP)免疫检测侧向流层析纸条。

背景技术

免疫分析方法基于抗原抗体间特异性结合原理，对待测样品进行定性或定量检测。基于侧向流纸条的免疫层析检测由于检测方法简单、检测成本低、检测时间短等优点，在疾病初筛及快速诊断方面一直发挥着重要的作用。然而，由于受检测原理自身局限性的影响，侧向流纸条免疫层析检测的灵敏度相对较低，且难以实现准确的定量检测。

传统的侧向流纸条依靠硝酸纤维膜提供的毛细管层析作用力实现检测样品的定向运动，并通过测试线实现待测样品的捕获与检测，其不足之处在于，检测样品在硝酸纤维膜上的层析流动过程中，部分待测样品会不可避免的残留在测试线上游的纸条区域，由此降低了检测灵敏度。另外，由于受到不同纸条间硝酸纤维膜一致性差异的影响，在单一的毛细管层析作用下，即使相同浓度待测样品，其在测试线上的捕获结果也会存在差异，因此，传统侧向流纸条难以实现定量检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种离子浓度极化效应ICP免疫检测侧向流层析纸条。通过在传统的侧向流纸条上增加Nafion选择透过膜并在纸条两端施加电场，利用电场作用下的ICP效应富集带负电荷的样品，提高检测灵敏度，改善检测重复性，为实现定量检测打下良好的基础。首先将第一吸水垫和第二吸水垫分别接触纸条两端并用水或者缓冲液润湿，然后将待测样品加到纸条的加样点，在纸条两端施加电场，在Nafion选择透过膜上游端加负电极，纸条的另一端加正电极，通电后，由于ICP效应，带负电荷的样品向电场正极移动，相互聚集并最终被测试线捕获，通电结束后，将第二吸水垫移开并将第三吸水垫与纸条接触，同时使标记垫接触纸条，用缓冲液冲洗标记垫，在层析作用下，标记物质分别与测试线上的样品及控制线相结合，由此实现了免疫检测。控制线用来验证纸条检测结果是否有效，若控制线上物理信号幅值低于某一门限值，则纸条检测结果无效，如果控制线上的物理信号幅值超过某一门限值，则纸条检测结果有效。对测试线上的物理信号进行分析，可用于定量检测。检测过程中，在纸条上的Nafion选择透过膜和电场相互作用下，使得带负电荷的样品在ICP的作用下向测试线方向移动，减少了样品在加样点与测试线之间的残留，可以有效提高检测的灵敏度。

本发明提供一种离子浓度极化效应ICP免疫检测侧向流层析纸条，离子浓度极化效应ICP免疫检测侧向流层析纸条包括Nafion选择透过膜、标记垫、测试线、控制线和吸水垫。

本发明中，首先将第一吸水垫和第二吸水垫分别接触纸条两端并用水或者缓冲液润湿，然后将待测样品加到纸条的加样点，在纸条两端施加电场，在Nafion选择透过膜上游端加负电极，纸条的另一端加正电极。通电后，由于ICP效应，带负电荷的样品向电场正极移动并相互聚集，最终被测试线捕获。通电结束后，将第二吸水垫移开纸条并将第三吸水垫与纸条接触，同时使标记垫接触纸条，用缓冲液冲洗标记垫，在层析作用下，标记物质分别与测试线上的样品及控制线相结合。控制线用来验证纸条检测结果是否有效，若控制线上物理信号幅值低于某一门限值，则纸条检测结果无效，如果控制线上的物理信号幅值超过某一门限值，则纸条检测结果有效。对测试线上的物理信号进行定量分析，实现定量检测。

优选的，在检测纸条上构建一个Nafion选择透过膜区域，Nafion选择透过膜使阳离子选择性通过，形成一个阴离子排空区，使带负电荷的样品富集。

优选的，检测纸条上构建有一个测试线区域，在ICP作用下，带负电荷的样品向电场正极移动，相互聚集并最终被测试线捕获。

优选的，检测纸条上在测试线下游构建有一个控制线区域，通过免疫反应原理实现标记物质的捕获。

优选的，样品加入点应位于Nafion选择透过膜和测试线之间，加样区域大小不做具体限定。

优选的，此检测纸条为纤维膜或硝酸纤维素膜等多孔材料，可用于富集并检测DNA、带负电荷的抗原抗体、或者其它带负电荷的生物样品。

优选的，反应过程中，标记垫位于Nafion选择透过膜和测试线之间，标记垫上的标记物质可为荧光颗粒、胶体金颗粒或乳胶颗粒等。

优选的，通电检测前，首先要将纸条两端的第一吸水垫和第二吸水垫接触纸条并湿润，确保施加的电场能够作用到纸条上。

优选的，施加电场时，湿润的第一吸水垫、第二吸水垫应分别位于Nafion选择透过膜的上游和测试线的下游。