[发明专利]一种大银鱼与太湖新银鱼的分子鉴别方法

权利要求书

1.一种大银鱼与太湖新银鱼的分子遗传鉴别方法，其特征在于包含以下步骤：

（1）分别提取待鉴定的大银鱼与太湖新银鱼基因组DNA；

（2）以提取的基因组DNA为模板，PCR扩增大银鱼与太湖新银鱼的细胞色素b基因Ctyb；用于PCR扩增大银鱼与太湖新银鱼的细胞色素b基因的上游引物为L14321：SEQ ID NO.1，下游引物为H15634：SEQ ID NO.2;

（3）扩增产物纯化后，直接测序，Cytb基因第45位点碱基是T的为大银鱼，若该位点是C的为太湖新银鱼;所述的Cytb基因序列如下:

ATGGCCAACCTCCGAAAAACTCACCCTTTGCTGAAAATGACTAATCACGCTTTAGTCGACCTACCTGCCCCTTCAAACCTTTCAGTTTGGTGAAACTTTGGCTCCCTTTTGGGAATCTGCCTAGTTCTCCAAATCCTAACAGGCCTATTCATGGCCATGCACTACGCCCCCGAAACCGCGAATGCATTCTCTTCTGTCGCCCACATATGTCGGGACGTCAACAACGGCTGACTAATACGCAACATGCATGCCAACGGAGCATCTTTCTTCTTCATCTGTGTTTACCTCCACATCGGCCGAGGTCTTTACTACGGCTCATACCTTTACCAAGCAACATGAAATGTTGGAGTAGTCCTTCTCCTCCTGCTAATAATAACTGCCTTTGTAGGCTACGTCCTCCCCTGAGGACAAATGTCGTTCTGAGGGGCAACAGTAATCACCAACCTCCTCTCTGCCGCCCCCTACGTGGGATTCGACCTAGTTTTATGACTATGAGGGGGGTTCTCTGTAGACAATGCCACCCTCACTCGATTCTTCGCCTTCCACTTCATTCTCCCTTTCATCATTGCCGCCGCCACTGTCATTCACCTCCTTTTCCTCCACGAAACGGGATCAAACAACCCACTTGGCCTTAGCTCAGACGTAGATAAAATCCCTTTCTTGCCATACTATATTATCAAGGACGTAGTCGGCTTCCTAGTCTTTTTCCTCGCCTTCTTCTCAATCACCCTGTTCTTCCCCAACCTCCTCGGCGACCCAGATAATTTTACAGAGGCCAACCCCCTCGTCACCCCAGCCCACATTAAACCTGAGTGGTACTTTCTTTTCGCCTACGCTATCCTCCGGTCTATTCCCAGCAAACTGGGCGGTGTTTTAGCCCTCCTCTTCTCTATCCTGGTGCTCCTTCTAGTGCCATTCCTTCACACCTCTAAACAGCAAGGCCTAGCTTTTCGCCCACTCACCCAACTACTCTTCTGGTCTCTCGTGGCTGATGTTTTTATCCTTACATGAATCGGGGGAATACCTGTAGAACACCCCTACATCGTAATTGGCCAAATTGCTTCCGTAATCTACTTCTCCATCTTCCTGATTCTTTTCCCCTTTGTAGGCTGGGCCGAAAATAAAATCCTCAAATGAGCCT。

2.根据权利要求1所述的分子遗传鉴别方法，其特征在于PCR反应体系为50μL： 100ng/μL的模板DNA 1μL，PCR缓冲液 5μL，dNTP混合液4μL ，每种dNTP 0.1mmol/L， 10 μmol/L的上、下游引物各1μL，2μL 2.5 IU的Taq酶；双蒸水36μL；所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0， 0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl₂，0.01%（w/v）明胶组成。

3.根据权利要求1所述的分子遗传鉴别方法，其特征在于PCR扩增反应程序为：94 ℃预变性4 min，94 ℃变性40 s，55 ℃退火40 s，72 ℃延伸90 s，经35个循环后再72 ℃延伸10min。