[发明专利]一种继发龋动物模型在审
申请号: | 201610823128.7 | 申请日: | 2016-09-14 |
公开(公告)号: | CN107041797A | 公开(公告)日: | 2017-08-15 |
发明(设计)人: | 程磊;吴天木;周学东;李继遥;任彪;冯明业;李博磊;张华锦 | 申请(专利权)人: | 四川大学 |
主分类号: | A61D5/00 | 分类号: | A61D5/00;A61D7/00;A01K67/02;A61K49/00 |
代理公司: | 北京华智则铭知识产权代理有限公司11573 | 代理人: | 田建涛 |
地址: | 610065 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 继发龋 动物 模型 | ||
技术领域
本发明涉及实验动物模型领域,具体提供了一种继发龋动物模型。
背景技术
龋病是口腔最常见疾病之一,充填治疗是其最常规治疗方式。充填治疗的充填材料对于继发龋的抑制作用的评估急需解决但尚无可行性方案。自1928年McCollum将动物实验引入龋病研究,龋病的动物实验研究方法不断改进,直至1958年Keyes建立了至今仍是最为广泛承认和使用的龋病研究的“Keyes龋病动物模型”。Keyes模型建立了一套完整的龋病发生,发展和评估的动物模型,多用于各种致龋因素的探究。但随着时代的发展,此方法也逐渐暴露出一些不能与时俱进的问题。最典型的就是,Keyes模型适用于自然龋病的评估,并不适用于充填后的继发龋研究,当今用于龋病充填口腔材料层出不穷,对于它们的体外实验也种类繁多,唯独没有一种动物实验模型能够满足充填继发龋的评估,更不要说抑制继发龋的充填材料的评估。
发明内容
基于现有技术仅能满足原发龋病研究,对于抑制口腔继发龋及其药物效用的评估并没有可行动物实验模型的这一问题,本发明提供了一种继发龋动物模型,它包括如下操作:
(1)取除人外的易产龋动物,抗生素处理三天,同时以SPF级饲料喂养;
(2)抗生素处理完后,使用SPF级饮用水和饲料喂养一天;
(3)麻醉后,在第一磨牙的第一裂隙处制备直径约0.6mm,深0.3-0.6mm的洞型,再在洞型内填入填充物;
(4)从第5日起,在易产龋动物口内接种可致龋的细菌,同时,换用蔗糖水、致龋饲料,饲养3周,即得继发龋动物模型。
本发明所述“易产龋动物”,是指容易产生龋齿的动物。
本发明一个具体实施方式中,蔗糖水的浓度为5%g/ml,致龋饲料为2000#。
其中,步骤(1)中,所述除人外的易产龋动物为啮齿动物或灵长类动物。
其中,所述啮齿选自大鼠,进一步为Wistar大鼠或SD大鼠,优选使用Wistar大鼠。
进一步地,本发明所使用的Wistar大鼠为3周龄。
进一步地,步骤(1)中,所述抗生素为广谱抗生素;进一步选择青霉素类抗生素,优选为氨苄青霉素。本发明一个具体实施方式中,针对相对应的大鼠,给予氨苄青霉素水溶液浓度为1g/L。
进一步地,步骤(3)中,分别在上颌或下颌左右第一磨牙的第一裂隙处制备洞型。
进一步地,步骤(3)中,选择在上颌左右第一磨牙制备洞型。理论上, 上下颌都可以,但是下颌的操作性极差,最后使用上颌第一磨牙也是综合了上下颌所有牙做出的选择。
进一步地,步骤(3)中,所述填充物是已知填充材料、待测材料或/和待测药物。填入填充材料后产生的龋称为继发龋。本发明一个具体实施方式中,一侧洞型选用材料为日本可乐丽公司(Kuraray)生产的树脂粘结剂(SE BOND),另一侧为加个一种抗菌药物DMADDM的SE BOND,其结果可测评两种药物的抗菌差异。在实际使用的过程中,同一只大鼠的两侧分别为不同药物,可形成在同一个体的左右对照,其数据更具说服力。
进一步地,步骤(4)中所述接种变异链球菌,是将10^8CFU/ml变异链球菌混悬液涂布于口腔内,每日涂布两次,间隔20-40分钟(本发明一个具体实施方式中间隔30分钟),连续三日。
本发明提供的继发龋动物模型,解决了现无模型适用于充填体抑制继发龋效用评估的弊端,对继发龋填充材料或药物的研究提供了基础。
本发明中,口腔科一切可用于牙齿备洞的器材均可用于制备洞型,进一步地,根据动物口腔的大小,对于大鼠,推荐齿科直机配合长柄求钻,直径约0.6mm。
本发明中选用的洞型尺寸大小,是通过大量的实验数据发现,在操作便捷的情况下,同时满足备洞的固位型和不穿髓,只能采用本发明记录的尺寸范围,也仅有在此范围内才能成功造模。另外,本发明造模过程中,大鼠死亡是前期实验中遇见的一个障碍,实验发现,备洞是导致死亡的最重要操作过程。不仅如此,某些程度的备洞失败(如穿髓),虽然不会导致死亡,但也导致样本的剔除,所以本发明造模过程中最核心和最“危险”的操作就是备洞。通过大量的实验发现,备洞最重要的就是器械选用和备洞位点,备洞位点如上所述,而器械则选用长柄球钻,球钻直径0.6mm。
基于上述动物模型,本发明还提供了对继发龋药物活性的评估方法,它包括如下操作步骤:
(1)按照上述方法制备继发龋动物模型中,不同的是,在同一动物模型左右制备的洞型中分别填入待测药物或对照物,但至少有一个洞型填入了待测药物;
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