[发明专利]壳聚糖修饰的AgI/TiO2复合物及其构建比色免疫传感器用于氯霉素检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品中氯霉素检测领域，具体是制备壳聚糖修饰的AgI/TiO₂复合物，利用其光催化性质构建比色免疫传感器，实现对氯霉素的检测。

背景技术

氯霉素是一种光谱抗生素，虽具有较好的抑菌作用，但是其也会对骨髓造血机能有抑制作用，可引起血小板减少、再生障碍性贫血等 （Miao, Y., Ren, H., Gan, N., Cao, Y., Li, T., Chen, Y., 2016. Biosens. Bioelectron. 81, 454-459.）。氯霉素尤其在畜牧业中应用最为广泛，同时也会在一些动物性食源产品中造成残留，对人体的健康造成较大的危害。基于抗原-抗体特异性反应的免疫分析法是检测抗生素最为常用的方法，最近几年，多种多样的免疫分析技术被开发利用，如光电免疫分析（Liu, Y., Yan, K., Okoth, O., Zhang, J., 2015. Biosens. Bioelectron. 74, 1016-1021.），电化学免疫分析（Kim, D., Rahman, M., Do, M., Ban, C., Shim, Y., 2010. Biosens. Bioelectron. 25, 1781-1788.），ELISA（Wang, L., Zhang, Y., Gao, X., Duan, Z., Wang, S., 2010. J. Agric. Food Chem. 58, 3265-3270.），表面加强拉曼散射免疫分析（Yang, K., Hu, Y., Dong, N., 2016. Biosens. Bioelectron. 80, 373-377.），比色免疫分析（Abnous, K., Danesh, N., Ramezani, M., Emrani, A., Taghdisi, S., 2016. Biosens. Bioelectron. 78, 80-86.）等等。其中比色分析方法是一种灵敏度和准确度均很高的分析方法，只需裸眼观察就可进行半定量分析，结合紫外可见分光光度计能实现微量甚至痕量检测。由于其价格低廉、设备小型化、操作简便等优点，比色分析方法被广泛应用于环境、医学、食品检测等领域，已成为检测抗生素的有力方法。

天然酶的结构容易发生变化、在生物体内含量很低、储存条件比较苛刻等因素大大限制了其实际应用。由于纳米材料模拟酶对酸、碱、温度具有较好的稳定性且催化活性较高,已成为生命分析化学等相关领域的研究热点之一。纳米材料模拟酶在比色传感、生物传感、降解环境污染物、电化学传感等方面已显示出诱人的应用前景 （Dutta, S., Ray, C., Mallick, S., Sarkar, S., Sahoo, R., Negishi, Y., Pal, T., 2015. J. Phys. Chem. C. 119, 23790-23800. Qin, W., Su, L., Yang, C., Ma, Y., Zhang, H., Chen, X., 2014. J. Agric. Food. Chem. 62, 5827-5834. Zhao, H., Dong, Y., Jiang, P., Wang, G., Zhang, J., 2015. ACS Appl. Mater. Interfaces. 7, 6451-6461.）。从实际应用的角度考虑,探寻具有高催化活性的、稳定的、可重复利用的模拟酶纳米材料尤为重要。

发明内容

本发明所采用的技术方案是：壳聚糖修饰的AgI/TiO₂复合物的制备方法，按照如下的步骤进行：

步骤一、将TiO₂纳米颗粒浸泡在AgNO₃和壳聚糖的混合溶液中，搅拌2小时，之后加入KI溶液，继续搅拌2小时，将溶液离心清洗，即制得壳聚糖修饰的AgI/TiO₂复合物，记为CS-AgI/TiO₂；

步骤二、将步骤一制备好的CS-AgI/TiO₂复合物用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化30分钟，然后加入氯霉素抗体anti-CAP，震荡6-12小时，离心清洗得到氯霉素抗体和CS-AgI/TiO₂的结合物，记为anti-CAP-CS-AgI/TiO₂；