[发明专利]检测Cry1Ie蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种Cry1Ie单克隆抗体细胞株，于2016年5月19日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.12297。本发明通过对Cry1Ie蛋白的氨基酸序列的抗原性、亲水性和表位性分析，选定抗原表位，人工合成特异性肽段，进而得到抗Cry1Ie蛋白的单克隆杂交瘤细胞株，为研制灵敏、快速的Bt Cry1Ie晶体蛋白检测试剂盒(试纸条)奠定了基础，在Cry1Ie蛋白定性、定量检测方面具有广阔的前景。本发明的单克隆抗体，对在植物中表达的Bt Cry1Ie蛋白具有高亲和力，用于定性或定量检测棉花、玉米等转基因植物中的Bt Cry1Ie蛋白，具有特异性强、快速、灵敏的优点。

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，具体地说，涉及一种检测Cry1Ie蛋白的Cry1Ie单克隆抗体细胞株、单克隆抗体及其应用。

背景技术

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)是世界公认的生产规模最大、应用最广泛、最具有前途的微生物杀虫剂，其产生的杀虫晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌发挥杀虫活性的主要物质，编码杀虫晶体蛋白的基因称为Bt基因。1981年，Schnepf等人首次成功克隆了第一个编码Bt杀虫晶体蛋白基因，揭开了利用基因工程培育抗虫植物的序幕。转基因玉米是第一个规模化种植的转基因作物，自1996年商业化种植以来，种植面积和种植国家不断增加。

Bt cry1Ie基因是中国农业科学院植物保护研究所从Bt菌株Btc007中分离克隆的一个具有自主知识产权的杀虫蛋白基因(专利号：ZL03149867.1)，它与目前在转基因植物中广泛应用的cry1A类基因相似性很低，只有30％，并且它们之间没有交互抗性。其编码的蛋白对亚洲玉米螟有一定的杀虫活力，而且对Cry1A类抗性亚洲玉米螟具有一定毒力。因此cry1Ie基因可与其他Bt基因形成二价转基因抗虫玉米，在克服Bt基因种类单一、同源性高、产生交互抗性的问题上发挥重要作用。然而转基因玉米种植带来巨大经济效益的同时，其潜在的环境安全问题也引起了大家广泛的关注。

目前，转基因植物及其产品的检测大部分是基于核酸和蛋白质水平。核酸水平检测遗传物质中是否含有插入的外源毒素基因，如PCR、定量PCR等；蛋白质水平利用插入外源毒素基因表达的蛋白质产物或其功能进行检测，如酶联免疫检测法、Western blot法、试纸条法等。在转基因植物检测中，采用酶联免疫检测技术(ELISA)检测Cry毒素是目前公认的一种具有明显 优势的技术，它具有快速、准确、灵敏度高、能大量检测样本等优点。然而，获取具有强亲和力、高特异性的Cry毒素抗体(单克隆、多克隆、单链抗体)是这一技术的关键。

单克隆抗体技术是将骨髓瘤细胞和经某种抗原诱导产生的特异性B细胞经PEG等融合剂作用或电激光融合，形成杂交瘤细胞然后筛选分离出单个阳性杂交瘤细胞。再将其扩增最终分离，纯化抗体的过程。杂交瘤细胞具有双重特性既能如骨髓瘤细胞般持续繁殖，又能如B细胞一样分泌针对单一抗原表位的特异性抗体。单克隆抗体与抗血清又称多克隆抗体(polyclonal antibody PcAb)，主要区别是单克隆抗体是一种均一的免疫球蛋白分子，具有针对一个抗原决定簇的特异性；与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有无可比拟的优越性：如高特异性、高纯度、均质性好、重复性好、效价高、等优点，在医学治疗及诊断等有广泛应用。

发明内容

有鉴于此，本发明所要解决的技术问题是提供一种检测Cry1Ie蛋白的Cry1Ie单克隆抗体细胞株、单克隆抗体及其应用。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种Cry1Ie单克隆抗体细胞株，于2016年5月19日，保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.12297。

本发明还公开了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.12297的Cry1Ie单克隆抗体细胞株产生，所述单克隆抗体是对Cry1Ie蛋白有特异性的单克隆抗体。