[发明专利]一种寨卡病毒特异性检测靶序列、质粒标准分子及其检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种ZIKV特异性检测靶序列、质粒标准分子及其核酸检测试剂盒，该质粒标准分子为含有具有碱基组成SEQ ID NO：1的检测靶序列。所述核酸检测试剂盒为：由SEQ ID NO：2‑5组成的核酸检测巢式PCR引物体系，由SEQ ID NO:7‑9组成的核酸检测荧光定量PCR引物体系及SEQ ID NO：6的逆转录引物。本发明成功构建了ZIKV特异性质粒标准分子及其PCR检测体系，为人群及媒介蚊虫野生种群ZIKV携带背景调研与诊断建立了简便、价廉、特异的核酸检测体系。

技术领域

本发明属于生物领域，主要涉及一种寨卡病毒(ZIKV)特异性检测靶序列、质粒标准分子及其核酸检测试剂盒。

背景技术

寨卡病毒(Zika Virus,ZIKV)是一种通过蚊虫传播的蚊媒病毒，属于黄病毒科黄病毒属，1947年首次在乌干达恒河猴中分离出。寨卡病毒感染人类引起的临床表现不特异如低热，皮疹，结膜炎，关节痛等。在之后的60年里，只在亚洲和非洲部分地区有散在的人类感染寨卡病毒的报告。2007年，寨卡病毒首次在亚洲和非洲之外的地区出现并且在西太平洋雅浦岛引起流行，随后迅速扩散至太平洋其他国家。2015年，巴西确认第一例本土寨卡病毒病例，并且确认病毒在多个地区形成流行，同时，在巴西东北部伴随有婴儿小头畸形发病率的提高。流行病调查显示，婴儿小头畸形的发生与孕妇感染寨卡病毒有关。2016年1月份，中国确诊第一例输入性寨卡病毒感染患者。传播寨卡病毒的蚊种主要为伊蚊，在我国有埃及伊蚊和白纹伊蚊的广泛分布。虽然寨卡病毒还没有在我国出现流行，但是随着国际交流，旅游等的日益便利频繁，病毒很有可能会传入中国，甚至引起大流行。特别是全球气候变暖，使得伊蚊繁殖更多，分布范围更广，更加加剧寨卡病毒传播的可能性。寨卡病毒感染的早期诊断是控制病毒传播的重要措施。检测蚊媒体内携带寨卡病毒的量，知晓蚊媒对病毒的感染率、传播率和扩散率对蚊媒的防控具有关键意义。目前，人群病人诊断的措施有血清学检查，抗原测定，病毒分离和病毒核酸检测，抗原抗体检测容易与其他黄病毒属病毒引起交叉反应，病毒分离消耗时间长。因此，开发一种能早期迅速的从病人和蚊媒中检测寨卡病毒的高度灵敏、特异且价廉、易用的检测方法刻不容缓。

发明内容

本发明需要解决技术方案之一是提供一种寨卡病毒特异性核酸检测靶序列。

解决上述技术问题的技术方案的如下：

构建的ZIKV特异性检测靶序列,具有SEQ ID NO：1所示碱基组成。

本发明另一目的是提供一种重组质粒或质粒标准分子或标准物质或E.coli工程菌菌株。实现上述目的的技术方案如下：

一种包含有上述任一所述ZIKV特异性检测靶序列的重组质粒或质粒标准分子或标准物质；进一步以该重组质粒转染细菌E.coli，获得能用于生产该重组质粒的工程菌菌株。

本发明的另一目的是提供ZIKV特异性核酸检测试剂盒。

实现上述目的的技术方案如下：

一种针对SEQ ID NO：1的ZIKV特异性核酸检测试剂盒，包括有：碱基组成为SEQ IDNO：2和SEQ ID NO：3构成的巢式PCR外引物对，SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5构成的巢式PCR内引物对，以及由SEQ ID NO：6所示碱基构成的逆转录引物，SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8构成的实时荧光定量PCR引物，由SEQ ID NO：9所示碱基构成的荧光定量PCR探针。

所述实时荧光定量PCR引物和荧光定量PCR探针的荧光报告基团均为FAM、JOE、ROX、TET、TAMRA、HEX、VIC、CY3、CY5或Texas Red中的至少一种；所述实时荧光定量PCR引物和荧光定量PCR探针的荧光淬灭基团均为MGB、BHQ、TAMRA、Eclipse、Dabcyl、LowaBlackTMRQ或Lowa BlackTMFQ中的至少一种。