[发明专利]用于生产DHHA的基因工程菌株及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种用于生产2，3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸(2，3-dihydro-3-hydroxyanthranilic acid，简称DHHA)的基因工程菌株及其用途。

背景技术

2，3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸(Trans-2，3-dihydro-3-hydroxyanthranilic acid，DHHA)，也叫(5S，6S)-6-氨基-5-羟基-1，5-环己二烯甲酸((5S，6S)-6-amino-5-hydroxy-cyclohexa-1，5-dienecarboxylic acid，2，3-trans-CHA)，CAS编号38127-17-2，分子式C₇H₉NO₃，是一种重要的通过分支酸途径合成的中间代谢产物。。

1962年，由McCormick等人[McCormick JRD，Reichenthal J，Hirsch U，et al.(+)trans-2，3-DIHYDRO-3-HYDROXYANTHRANILIC ACID.A NEW AMINO ACID PRODUCED BY Streptomyces aureofaciens[J].Journal of the American Chemical Society，1961，83(19)：4104-4105.]在一株当时被认定为金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)NRRL 2209的一株低产四环素的突变株中分离得到，并通过元素分析，紫外红外吸收光谱及化学转化的方法，最终确认产物结构为DHHA(DHHA)。2001年，M.McDonald等人在荧光假单胞菌中确认了DHHA作为假单胞菌的吩嗪合成途径的一种中间代谢产物，由分支酸经过PhzE及PhzD催化后产生[McDonald M，Mavrodi DV，Thomashow LS，et al.Phenazine Biosynthesis in Pseudomonas fluorescens：Branchpoint from the Primary Shikimate Biosynthetic Pathway and Role of Phenazine-1，6-dicarboxylic Acid[J].Journal of the American Chemical Society 2001，123(38)：9459-9460]。2009年，R.Bujnicki通过在删除了完整的芳香族氨基酸竞争途径，从而改善了分支酸供应量的大肠杆菌中，通过异源表达phzD，phzE两个基因，在2升发酵规模，限定L-酪氨酸的分批补料的发酵条件下，得到12g/L的DHHA[R.Bujnicki，Dissertation[D]，TU Munchen，2007]。

近年来，DHHA也被越来越多的用于化学研究中。Steel等人2003年的研究中发现，以外消旋形成合成的DHHA，可被立体选择性的氧化，反应类似于二醇2，3-trans-CHD及3，4-trans-CHD[Bongaerts J，Esser S，Lorbach V，et al.Diversity-Oriented Production of Metabolites Derived from Chorismate and Their Use in Organic Synthesis[J].Angewandte Chemie，2011，123(34)：7927-7932]的氧化。此外，DHHA及其衍生物已经被利用于环加成(cycloaddition)的反应中[Bunnage M E，Ganesh T，Masesane I B，et al.Asymmetric synthesis of the putative structure of(-)-oryzoxymycin[J].Organic letters，2003，5(3)：239-242]。