[发明专利]一种通过饲料实际制粒评价植酸酶的耐温抗逆性能的方法

说明书

本发明涉及一种低酶活饲料中饲用植酸酶活性的测定方法，并涉及一种通过饲料实际制粒评价植酸酶的耐温抗逆性能的方法，属于生物化学检测技术领域。所述低酶活饲料中饲用植酸酶活性的测定方法，通过限定试剂、细化试样溶液的过滤方法、调整稀释浓度、调整反应步骤，限定吸光度显示范围‑0.301‑4.000A等协同作用，使样品检出范围达到0.1‑50U/g。所述通过饲料实际制粒评价植酸酶耐温抗逆性能的方法，通过未添加植酸酶的粉状饲料制粒后再添加植酸酶，然后同一配方粉料先添加植酸酶后制粒，分别测定酶活，最后比较两种植酸酶添加方式酶活含量的差异，很好的消除了制粒前后酶活检出率差异，能够准确反映实际制粒的植酸酶存留率。

技术领域

本发明涉及一种低酶活饲料中饲用植酸酶活性的测定方法，并涉及一种通过饲料实际制粒评价植酸酶的耐温抗逆性能的方法，属于生物化学检测技术领域。

背景技术

植酸酶已经广泛应用于单胃动物的饲料生产中，大大降低了饲料成本和排泄磷对环境造成的污染，具有显著的经济效益、社会效益和生态效益。植酸酶也已经开始应用于水产动物饲料中，应用前景看好。然而，在中国的饲料工业中，70％以上的饲料是颗粒饲料，而植酸酶作为一种蛋白质，对热非常敏感。特别是在饲料制粒过程中，受到高温、高湿以及某些金属离子等条件的影响，非常容易失活。

随着现代生物技术和酶工程技术的不断进步，植酸酶生产工艺也取得了很大发展，各种耐高温植酸酶产品应运而生，但由于缺乏准确有效的耐高温性能评价方法，用户常常陷入不能合理并有效评价植酸酶产品的耐温性能的困境。

饲料的实际制粒过程各个加工阶段简介如下：

1、混合：将各个原料按照饲料配方称量后用混合机混合均匀，混合形成的粉状饲料称为粉料，即调质前粉料。

2、调质：混合后的粉料进入调质器调质。调质是指粉料在调制器内和一定温度的水蒸气充分混合后，形成含有18％左右水分的湿粉料的过程。该湿粉料即调制后湿粉料。

3、制粒：经过调质后的湿粉料进入制粒环模，被挤压成粒的过程。

4、冷却和筛分：出环模的颗粒，经过分级筛筛分为成品颗粒和非成品两部分，同时经受鼓风机鼓出的空气冷却到接近常温的饲料颗粒。非成品部分再回到制粒环模中再制粒。接近常温的成品颗粒就可以进入包装工序包装出厂。可以包装出厂的饲料颗粒即颗粒饲料。

通过饲料实际制粒评价植酸酶的耐温抗逆性能的方法，涉及两大部分技术，一是含植酸酶样品(包括含植酸酶的饲料)的植酸酶含量的测定方法，二是饲料实际制粒过程中外源植酸酶在饲料中酶活存留率的测定方法，分别介绍如下。

一、现有含植酸酶样品(包括含植酸酶的饲料)的植酸酶含量的测定方法

其名称为GB/T 18634—2009饲用植酸酶活性的测定(分光光度法)，现就和本发明相关部分简要说明，并指出其存在的不足，为方便与国标对比，以下编号为与国标对应的编号：

1范围

该方法使用范围是用作饲料添加剂用的植酸酶产品，以及添加有植酸酶的配合饲料。样品最低检出量为130U/kg。而实际上，配合饲料中目前一般添加植酸酶(5000U/g)100-1000g/吨，即使忽略饲料加工过程中的损失，经计算也可以知道配合饲料中植酸酶含量是0.5-5U/g，远远低于该方法最低检出量，故现有测定方法并不适用于实际配合饲料植酸酶的检测。

5、试剂和材料

国标检测方法中其中一种关键的液体试剂是乙酸缓冲液(1),c(CH₃COONa·3H₂O)＝0.25mol/L：称取20.52g无水乙酸钠于1000mL烧杯中，加入900mL水搅拌溶解，用冰乙酸调节pH值至5.5±0.01，再转移至1000mL容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度。室温下存放2个月有效。