[发明专利]一种富含中性蛋白酶的饲料级发酵大米粉及其制备方法

权利要求书

1.一种饲料级发酵大米粉，其特征在于中性蛋白酶平均比活力为5500-8000u/g，以质量计粗蛋白含量为65-80％；

其制备方法包括：采用固态发酵的方法，以芽胞杆菌AS1.398为菌种，碳源包括水分含量为55-65％的大米蛋白粉，氮源包括水分含量为55-65％的大米蛋白粉和缓释尿素，辅料包括磷酸二氢钾和磷酸氢二钠，培养基的PH值调节剂为碳酸钠和碳酸钙。

2.如权利要求1所述大米粉，其特征在于所述制备方法包括以下步骤：

a、培养基的制备：

液体培养基：氯化钠5.3g，牛肉膏10.2g，蛋白胨9.7g，琼脂21.0g，加入1.2L蒸馏水中，用碳酸钠和碳酸钙调整pH值至7.2，118℃灭菌30分钟，得液体培养基；

摇瓶培养基：每5000ml包括大米粉150g，乳糖50g，磷酸二氢钾10.0g，磷酸氢二钠20.0g，7水硫酸镁8g，牛肉膏7g，以体积计4％的豆浆，其余为灭菌水；用碳酸钠和碳酸钙调整PH值为7.1-7.3，110℃灭菌30分钟，得摇瓶培养基；

b、种子菌液的制备：

取枯草杆菌AS1.398斜面，转接于空白琼脂培养基斜面上，30℃培养36h；取3-5环菌种接于装有400ml液体培养基的1000ml的三角瓶中，30℃培养10小时；取三角瓶中的菌液30-80ml于5000ml装有摇瓶培养基的生物耗氧挡板摇瓶中，30℃、240r/min进行二次扩大培养10小时，得种子菌液；

c、固态发酵：

固态发酵培养基的制备：以重量计，取占固态发酵培养基混合物总量为95％-99％的饲料级大米蛋白粉均匀摊放，用灭菌水均匀喷淋至水分含量为55-65％，以质量计添加缓释尿素0.5％-1.5％、磷酸二氢钾0.2％-0.4％、磷酸氢二钠0.3％-0.8％,用碳酸钠和碳酸钙调整PH值为7.2-7.5，110℃高温蒸汽灭菌30分钟，得固态发酵培养基；

发酵：待固态发酵培养基温度冷却至28-32℃，取占固态培养基体积1‰的种子菌液，用灭菌后的喷雾器均匀喷洒在固态培养基上，每30分钟均匀翻动10次，30℃发酵48小时，得发酵后的产品；

d、发酵后产品的处理：

发酵后的产品在45-50℃下进行干燥，水份含量小于12％后冷却至常温，封装即可。

3.如权利要求1所述大米粉在水产饲料中的用途。

4.如权利要求1所述大米粉的制备方法，其步骤包括：

a、培养基的制备：

液体培养基：氯化钠5.3g，牛肉膏10.2g，蛋白胨9.7g，琼脂21.0g，加入，1.2L蒸馏水中，用碳酸钠和碳酸钙调整pH值至7.2，118℃灭菌30分钟，得液体培养基；

摇瓶培养基：每5000ml包括大米粉150g，乳糖50g，磷酸二氢钾10.0g，磷酸氢二钠20.0g，7水硫酸镁8g，牛肉膏7g，以体积计4％的豆浆，其余为灭菌水；用碳酸钠和碳酸钙调整PH值为7.1-7.3，110℃灭菌30分钟，得摇瓶培养基；

b、种子菌液的制备：

取枯草杆菌AS1.398斜面，转接于空白琼脂培养基斜面上，30℃培养36h；取3-5环菌种接于装有400ml液体培养基的1000ml的三角瓶中，30℃培养10小时；取三角瓶中的菌液30-80ml于5000ml装有摇瓶培养基的生物耗氧挡板摇瓶中，30℃、240r/min进行二次扩大培养10小时，得种子菌液；

c、固态发酵：

固态发酵培养基的制备：以重量计，取占固态发酵培养基混合物总量为95％-99％的饲料级大米蛋白粉均匀摊放，用灭菌水均匀喷淋至水分含量为55-65％，添加缓释尿素0.5％-1.5％，添加辅料磷酸二氢钾0.2％-0.4％、磷酸氢二钠0.3％-0.8％,用碳酸钠和碳酸钙调整PH值为7.2-7.5，110℃高温蒸汽灭菌30分钟，得固态发酵培养基；

发酵：待固态发酵培养基温度冷却至28-32℃，取占固态培养基体积1‰的种子菌液，用灭菌后的喷雾器均匀喷洒在固态培养基上，每30分钟均匀翻动10次，30℃发酵48小时，得发酵后产品；

d、发酵后产品的处理：

发酵后产品在45-50℃下进行干燥，水份含量小于12％后冷却至常温，封装即可。