[发明专利]一种黑果腺肋花楸开放式组织培养快速育苗方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种黑果腺肋花楸开放式组织培养快速育苗方法，属于农业生物技术领域。

背景技术

黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa)属蔷薇科腺肋花楸属落叶灌木。原产于美国东北部,欧洲已有100余年的引种栽培历史,全球品种资源达30余个，分别适用于食用、药用、园林绿化和适生于不同的气候、土壤条件。在欧美和东亚地区，该树种在园林绿化方面的应用非常广泛；由果实加工的药品、保健饮料和食品在市场上非常普及和流行。20世纪90年代初引入我国。其果实富含多种营养物质,花色苷、黄酮类化合物、多酚类物质,此外还含有多种维生素、有机酸、三萜类化合物等,果实及其提取物对心治疗心脏病、高血压等心脑血管疾病有特效。

黑果腺肋花楸的各种繁殖方式有多种，采用组织培养的方式进行繁殖的还很少。黑果腺肋花楸的组织培养技术尚不成熟，而且因各地实验环境不同，实验员设计实验的目的和方向不同，培养基配方千差万别，培养基配方中基本培养基和激素比例不同也导致培养出的瓶苗生长状况差异很大。目前，分化培养基配方大多采用MS作为基本培养基，加上不同浓度比例的6-BA和萘乙酸，生根配方主要采用MS培养基作为基本培养基，加上不同浓度比例的吲哚丁酸。蔗糖和琼脂的比例分别在千分之三十和千分六左右。这样在培养过程中会出现瓶苗分化较多，但幼苗长势太弱且成丛生长，不利于后期的生根培养；而在生根培养中，由于分化苗长势太弱，导致生根苗生根态势不好。且现有组培方法周期较长，不能满足生产需要。现有黑果腺肋花楸组培快繁体系的研究基本上都是在实验室小规模扩繁、无菌条件下进行的，尚未有大规模开放式快速培育黑果腺肋花楸的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种黑果腺肋花楸开放式组织培养快速育苗方法，通过改良分化培养基使组培苗分化系数高，长的壮；采用添加抑菌剂的生根培养基，用开放式组培方法，成本低、周期短，且生根效果好。整套方法不仅缩短培育周期，还可以大幅降低生产成本。

本发明的技术方案是：一种黑果腺肋花楸开放式组织培养快速育苗方法，将外植体消毒处理接种后，按如下步骤进行：

(1)分化培养

分化培养基为：改良WPM+0.02mg/L NAA+1mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂粉；培养条件：温度25℃±3℃，湿度25％-50％，光照强度3000lx-6000lx，光照时间10h-12h；培养时间为15-20天；

所述改良WPM配方为：硝酸钾190mg/L，硝酸铵400mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，硫酸镁370mg/L，四水合硝酸钙684mg/L，硼酸6.2mg/L，四水合硫酸锰22.3mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.25mg/L，C₁₀H₁₃FeN₂NaO₈ 73.4mg/L，肌醇100mg/L,甘氨酸2mg/L,VB₁0.1mg/L,VB₆0.5mg/L,烟酸0.5mg/L；

(2)继代培养

培养基配方、培养条件及培养时间与步骤(1)分化培养相同；

(3)扩繁培养

扩繁培养基为：改良WPM+0.02mg/L NAA+1mg/L 6-BA+300mg/L核黄素+30g/L蔗糖+6g/L琼脂粉；培养条件：温度25℃±3℃，湿度25％-50％，光照强度3000lx-6000lx，光照时间10h-12h；培养时间为15-20天；

所述改良WPM配方与步骤(1)分化培养基中相同；

(4)生根培养

生根培养基为：1/2MS+0.5mg/L IBA+0.11mg/L GA+300mg/L核黄素+1ml/L抑菌剂Ⅰ+1.5ml/L抑菌剂Ⅱ+30g/L蔗糖+6g/L琼脂粉；

所述抑菌剂Ⅰ：1.5％益培隆和2.5％氯霉素各取1ml配制成1升抑菌剂Ⅰ；

所述抑菌剂Ⅱ：取对羟基苯甲酸乙酯20g，山梨酸钠15g，一水合柠檬酸三钾10g，配制成1升抑菌剂Ⅱ；

培养条件：温度25℃±3℃，湿度25％-50％，光照强度3000lx-6000lx之间，光照时间10h-12h，培养时间为15-18天。继续培养5-7天即可移栽。