[发明专利]一种EB病毒的lgG抗体检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明设计医学检验测试领域，具体涉及一种EB病毒的lgG抗体检测试纸条及其制备方法。

背景技术

EB病毒又称人类疱疹病毒，是Epstein和Barr于1964年首次成功地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，认为该病毒是多种恶性肿瘤(如鼻咽癌)的病因之一，它主要感染人类口咽部的上皮细胞和B淋巴细胞。在中国南方鼻咽癌患病人群中大多都检测到有EB病毒基因组存在。本病分布广泛，多呈散发性，亦可引起流行。病毒携带者和病人是本病的传染源。经口密切接触为主要传播途径，飞沫传播虽有可能，但并不重要。发病以15～30岁的年龄组为多，6岁以下多呈不显性感染。全年均有发病，似以晚秋初冬为多。一次得病后可获较持久的免疫力。

EB病毒进入机体有3种不同途径：一是EB病毒感染人类B淋巴细胞并增生，渗入感染细胞；二是EB病毒长期潜伏在淋巴细胞内，以环状DNA形式游离在胞浆中，并整合到染色体内；三是EB病毒能被灭活后重新产生感染性，按原有方式再感染细胞或者病毒传入到另一个个体。EB病毒最初复制部位是口咽部，在B淋巴细胞和口腔上皮细胞内生长繁殖，然后感染B淋巴细胞，这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染。并可长期潜伏在人体淋巴组织中，当机体免疫功能低下时，潜伏的EB病毒活化复发感染。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种快速高效的检测EB病毒的lgG抗体检测试纸条及其制备方法。

本发明的技术方案为：一种EB病毒的lgG抗体检测试纸条，包括：塑料底板、样品垫、吸水垫、包被有胶体金标记的EB病毒特异性重组抗原的金标垫聚酯膜、包被有EB病毒单克隆抗体的检测线和包被有二抗IgM的质控线的硝酸纤维素膜。

进一步的，所述样品垫的处理方法是将其浸于50ml的硼酸缓冲液中，均匀浸湿，然后在45℃烘干备用，所述硼酸缓冲液是含量为1～1.2％BSA，0.5～0.7％Tween20，2～2.4％PVP和5～5.6％海藻糖混合而成的，pH值为8.0～8.5。

进一步的，所述的二抗IgM为兔抗鼠IgM多克隆抗体。

进一步的，所述的小鼠IgM的浓度为3mg/ml，所述的EB病毒单克隆抗体的浓度为4mg/ml，所述的二抗IgM浓度为2mg/ml。

所述EB病毒的lgG抗体检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：

(1)胶体溶液的制备：取消过毒的三角烧瓶1个，容量为500ml，加入超纯水清洗干净后，加入超纯水248mL，而后加入质量浓度为1％的氯金酸HAuCl₄·3H₂O溶液2mL，配制成250mL0.01％氯金酸水溶液，加热煮沸并持续搅拌，在搅拌的同时加入质量浓度为1％柠檬酸三钠Na₃C₆H₅O₇·2H₂O溶液3～5mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，继续加热并搅拌5～10min后停止加热，冷却至室温后加入纯水至250ml，得到紫红色胶体金溶液，在2～8℃保存备用；

(2)金标EB病毒特异性重组抗原的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液140mL，用0.25mol/LNa₂CO₃调节胶体金溶液的PH至8.5～9.0，用电磁搅拌器以250r/min搅拌，搅拌的同时逐滴加入5mL含0.1mg的EB病毒特异性重组抗原溶液，加入后持续搅拌10min；然后逐滴加入1mL质量浓度为10％的亚硫酸铋琼脂作为稳定剂，继续搅拌10min，然后在2～6℃、2500～2700r/min离心处理30～40min，弃去沉淀；然后将红色上清溶液继续在上述离心条件下离心10～20min，弃上清液，收集沉淀，然后加入缓释剂重悬定容至5ml，即得到金标EB病毒特异性重组抗原；

(3)金标垫聚酯膜的制备：将步骤(2)所制备的金标EB病毒特异性重组抗原稀释至浓度为2mg/ml，然后用划膜仪以5μL/cm的浓度均匀喷在载体聚酯膜上，在37℃的恒温烘箱中烘干；

(4)包被有EB病毒单克隆抗体的检测线和包被有二抗IgM的质控线的硝酸纤维素膜的制备：EB病毒单克隆抗体稀释成4mg/mL，然后用划膜仪以5μL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，得到检测线；然后将二抗IgM稀释成2mg/mL，用三维平面点膜喷金仪仪器HM3055，将稀释好的二抗IgM均匀喷在硝酸纤维素膜上，得到质控线；