[发明专利]植物中间表达载体及其构建方法与应用

说明书

本发明提供的植物中间表达载体为pEXP‑DR，具有序列表中<400>1所示的序列，通过PCR扩增和酶切技术在质粒PSK中连接启动子、终止子获得，在植物基因工程载体构建方面具有重要应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是植物中间表达载体及其构建方法与应用。

背景技术

目前，在构建植物表达载体时，为了构建完整的表达盒和选择合适的酶切位点，需要将目的片段在多个中间表达载体之间进行多步构建。

而把表达盒和多克隆位点构建在一个载体上，作为通用载体适应于多条目的片段，并自带表达盒，大大节省了工作人员构建载体的时间，降低了复杂的多步构建中产生的费用，同时也减少了构建过程中出现错误的几率，是现阶段技术人员致力研究的技术内容。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供植物中间表达载体。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供所述植物中间表达载体的构建方法。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供所述植物中间表达载体的应用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

植物中间表达载体，pEXP-DR，具有序列表中<400>1所示的序列。

上述植物中间表达载体的构建方法，通过PCR扩增和酶切技术在质粒PSK中连接了外源片段DR、启动子、终止子序列，所述外源片段DR序列为序列表中<400>13所示的序列，启动子序列为序列表中<400>2所示的序列，所述终止子序列为序列表中<400>3所示的序列。

上述植物中间表达载体在植物基因工程载体构建方面的应用。

本发明的有益效果是：

本发明所述植物中间表达载体pEXP-DR把表达盒和多克隆位点构建在一个载体上，作为通用载体适应于多条目的片段，并自带表达盒，使植物中间表达载体不仅具有完整的表达盒，而且在各序列的上下游，添加了多克隆位点，便于外源基因片段的导入和该表达盒与各种植物表达载体的连接，大大节省了工作人员构建载体的时间，降低了复杂的多步构建中产生的费用，同时也减少了构建过程中出现错误的几率，使植物基因工程载体构建更加便利和高效。

附图说明

图1为载体PEXP构建流程图；

图2为pT-PA的PCR和酶切鉴定图，其中，泳道M：DNA分子量标准Trans2K plus；泳道1：pT-PA的PCR鉴定；泳道2：pT-PA的酶切鉴定；PA所标示的箭头指向酶切后0.3kb的PA片段；

图3为pT-TP的PCR和酶切鉴定图，其中，泳道M：DNA分子量标准DGL2000；泳道1：pT-TP的PCR鉴定；泳道2：pT-TP的酶切鉴定；TP所标示的箭头指向酶切后0.2kb的TP片段；

图4为pT-35S的PCR和酶切鉴定图，其中，泳道M：DNA分子量标准DGL2000；泳道1：pT-35S的PCR鉴定；泳道2：pT-35S的酶切鉴定；35S所标示的箭头指向酶切后0.8kb的35S片段；

图5为pSK-PA的PCR和酶切鉴定图，其中，泳道M1、M2：DNA分子量标准DGL2000、Trans2K plus；泳道1：pSK-PA的PCR鉴定；泳道2：pSK-PA的酶切鉴定；PA所标示的箭头指向酶切后0.3kb的PA片段；

图6为pSK-TP-PA的PCR和酶切鉴定图，其中，泳道M：DNA分子量标准DGL2000；泳道1：pSK-TP-PA的PCR鉴定；泳道2：pSK-TP-PA的酶切鉴定；TP-PA所标示的箭头指向酶切后0.5kb的TP-PA片段；