[发明专利]一种从马比木中提取高纯度药用植物单体喜树碱的方法

权利要求书

1.一种利用微生物发酵技术从马比木中提取高纯度药用植物单体喜树碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取工段：先用切片机将马比木原木切成片料，并用粉碎机将片料粉碎成颗粒装袋备用。发酵前24小时先按每2吨原料量对酶(1～2kg安琪高糖干酵母或发利干酵母)进行醪化处理。发酵时应将原料与水及醪化液搅拌均匀(人工或机械搅拌好)，放入以整张大棚膜垫好的发酵池中，大棚膜应完好、无破损，装入原料后将大棚膜各边收拢捆扎密封，封口处以薄膜捆扎密封，密封保温。发酵时间大约为2～3天(视气温不同)。向每个多功能提取罐中投入适量的、发酵好了的马比木颗粒。然后向多功能提取罐(8m³)泵至中泵入甲醇进行第一次提取。第二次、第三次提取方法同上(第二次提取甲醇用量：6～8倍物料量；第三次提取甲醇用量：4～6倍物料量)，除去多功能提取罐中的药渣。

(2)浓缩工段：将储料罐中的提取液泵至三效浓缩器中，加入适量的抗氧化剂进行浓缩，并回收溶剂。然后将其转移至单效加入适量的抗氧化剂后进一步浓缩至浸膏。

萃取工段：将浸膏投入到萃取罐(1000L)中，调PH值，并向萃取罐加入适量氯仿，搅拌，静置萃取，然后重复萃取3～4次，最后取酸水进行HPLC检测。

(3)复浓缩工段：将萃取液泵至常压浓缩罐中进行浓缩，并回收氯仿，得粗提物膏体。

(4)精制工段：向粗提物膏体中加入适量的加丙酮，搅拌均匀，静置12～24小时分层，抽滤，得粗品，母液回收丙酮后得回收母液。将甲醇和氯仿按一定比例混合，溶解上述粗品，搅拌均匀，静置分层，抽滤，得喜树碱粗品；然后将喜树碱粗品溶液碱水，过滤，得清液，加酸水,调pH,静置分层，抽滤，得喜树碱粗品；再将喜树碱粗品溶于适量氯仿,加热,浓缩，静置，冷却,析晶,分层，抽滤，得粗品,母液回收氯仿,其中再析出的喜树碱回到第2步；将上一步的粗品溶于氯仿,用碱水萃取,少量多次萃取,收集萃取液,调pH,静置分层，抽滤，得喜树碱初品；将所得喜树碱初品溶于混合溶剂装入打浆瓶中,加热,过滤；而后用蒸馏水淋洗上一步抽滤的滤饼,洗尽残余溶剂，得喜树碱产品；最后减压干燥喜树碱产品,粉碎,装袋,入库。

2.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术从马比木中提取高纯度药用植物单体喜树碱的方法，其特征在于，所述步骤(1)中应先将马比木发酵。每次加入甲醇的酒精度为70～80，用量为4～10倍物料量；提取时间：3～5小时；提取温度：25～40℃)。

3.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术从马比木中提取高纯度药用植物单体喜树碱的方法，其特征在于，所述步骤(2)应加入的抗氧化剂为二氧化硫和硫酸亚铁的一种或两种，数量为浓缩液的2～5％。浸膏需调PH值为2～6后再氯仿萃取。最后当酸水中喜树碱和9-甲氧基喜树碱含量低于200升/5克才萃取结束。

4.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术从马比木中提取高纯度药用植物单体喜树碱的方法，其特征在于，所述步骤(3)应常压浓缩罐中进行浓缩，并回收氯仿。

5.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术从马比木中提取高纯度药用植物单体喜树碱的方法，其特征在于，所述步骤(4)应向粗提物膏体中加入1～2倍量丙酮，并搅拌均匀，静置12～24小时后抽滤。

6.根据权利要求1(4)所述的利用微生物发酵技术从马比木中提取高纯度药用植物单体喜树碱的方法，其特征在于，喜树碱的精制的方法为：

a、加甲醇：氯仿＝1：3混合液50～70升溶解上一步的粗品，搅拌均匀，静置分层，抽滤，得粗品；

b、粗品：NaOH＝1：1～1.2，配成2～5％的碱水溶液，溶解粗品过滤，得清液，加酸水,调pH＝2～6,静置分层，抽滤，得粗品；

c、一公斤粗品溶于150～250L氯仿,加热(50～60℃),浓缩到原体积的1/3结束,静置，冷却,析晶,分层，抽滤，得粗品,母液回收氯仿,其中再析出的喜树碱回到第2步；

d、将上一步的粗品溶于氯仿(30L),用2～5％的碱水萃取,少量多次萃取,收集萃取液,调pH＝2～6,静置分层，抽滤，得粗品；

e、将上所得产品溶于混合溶剂(DMF:甲醇:丙酮＝6:3:2)混合液,装入打浆瓶中,加热(80～90℃)2～5小时,趁热过滤；

f、用蒸馏水淋洗上一步抽滤的滤饼,洗尽残余溶剂，减压烘干得高纯度喜树碱产品。