[发明专利]一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基，每1000ml培养基中包括有以下组分：PPLO肉汤10.5 g、脑心浸出液8.0 g、氯化钠4.0 g、硫酸镁0.05 g、氯化钾0.2 g、氯化钙0.09 g、磷酸氢二钠0.024 g、磷酸二氢钾0.03 g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鲜酵母浸出液60 ml、无菌猪血清100 ml、无菌马血清100 ml、氨苄青霉素100 mg、10%醋酸铊1 ml；并提供了其制备方法及应用。本发明的有益效果为：本发明提供的一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基及其制备方法和应用，与现有技术相比，具有生长迅速和滴度高的特点，分离出牛鼻支原体的成功率高。

技术领域

本发明涉及兽医生物技术领域，具体涉及一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基及其制备方法和应用。

背景技术

牛鼻支原体（Mycoplasma bovirhinis），可引起牛肺炎、乳腺炎、结膜炎和生殖道炎症。牛鼻支原体是一种重要却往往被忽视的病原。早在1947年Edward 报道从流产奶牛生殖道分离到一株支原体（Edward , D. G et al. 1947)，后经鉴定并命名为牛鼻支原体（Edward and Freundt，1956）。牛鼻支原体呈全世界范围分布。我国陈嘉棣等人在1985年报道从上海奶牛场分离到该菌，生理生化特性与定型菌株基本一致（陈嘉棣等，1985）。近些年，关于该菌与其他细菌如牛支原体、溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌混合感染，造成牛肺炎的病例屡见不鲜，给养牛业造成了严重经济损失，逐渐引起了兽医工作者、研究人员的重视。

牛鼻支原体是一类特殊的微生物，无细胞壁、由于其基因组很小、基因组中编码氨基酸和辅助因子合成的基因很少，导致其生物合成和代谢的能力相当有限，仅在特定的环境下生存，因此牛鼻支原体对体外培养基的选择也相当苛刻，需要从中摄取胆固醇、脂肪酸、核酸前体和能量来源等营养成分来促进自身繁殖。牛鼻支原体主要感染牛。关于牛鼻支原体的鉴定，目前主要依靠生理生化特性鉴定、聚合酶链式反应（Kobayashi H et al,1998; Miles K et al. 2004）和免疫试验包括生长抑制试验、代谢抑制试验、免疫荧光试验，而聚合酶链式反应和免疫实验均涉及牛鼻支原体纯培养物的分离与培养；而目前分离牛鼻支原体使用的主要为GS培养基和SP-4培养基，仍存在活菌滴度较低、繁殖能力差等问题，易产生漏诊；因此，本领域亟需高效、快速分离诊断牛鼻支原体的培养基以及分离纯化牛鼻支原体的方法，进而开展牛鼻支原体病原特性、培养特性、致病机理、疫苗制备、诊断与防控等研究。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基及其制备方法和应用。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基，每1000ml培养基中包括有以下组分：PPLO肉汤10.5 g、脑心浸出液8.0 g、氯化钠4.0 g、硫酸镁0.05 g、氯化钾0.2 g、氯化钙0.09 g、磷酸氢二钠0.024 g、磷酸二氢钾0.03g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鲜酵母浸出液60 ml、无菌猪血清100 ml、无菌马血清100 ml、氨苄青霉素100 mg、10%醋酸铊1 ml。

进一步的，上述的一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基，所述培养基为液体培养基形式或固体培养基形式。

进一步的，上述的一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基，所述用于牛鼻支原体分离纯化的液体培养基中，每1000ml液体培养基是由以下组分制备得到的：PPLO肉汤10.5g、脑心浸出液8.0 g、氯化钠4.0 g、硫酸镁0.05 g、氯化钾0.2 g、氯化钙0.09 g、磷酸氢二钠0.024 g、磷酸二氢钾0.03 g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鲜酵母浸出液60ml、1%酚红2.5 ml、无菌猪血清100 ml、无菌马血清100 ml、氨苄青霉素100 mg、10%醋酸铊1ml、余量为去离子水。