[发明专利]用于多重核酸测序的标签和引物

权利要求书

1.一组用于构建土壤样品中真菌ITS序列多重测序文库的PCR引物，其特征在于：所述的一组PCR引物包括正向引物组和反向引物组；

所述的正向引物组由以下引物组成：

引物F1：其序列为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，其中含有Index1：ACGATGCT；

引物F2：其序列为SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，其中含有Index2：AGACTGTC；

引物F3：其序列为SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，其中含有Index3：AGCATCGT；

引物F7：其序列为SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列，其中含有Index7：ATCGTAGC；

引物F8：其序列为SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列，其中含有Index8：CAGACTGT；

引物F9：其序列为SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列，其中含有Index9：CGATGCTA；

引物F12：其序列为SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列，其中含有Index12：CGTAGCAT；

引物F13：其序列为SEQ ID NO：13所示的核苷酸序列，其中含有Index13：CTACGATG；

引物F14：其序列为SEQ ID NO：14所示的核苷酸序列，其中含有Index14：GACAGTCT；

引物F23：其序列为SEQ ID NO：23所示的核苷酸序列，其中含有Index23：GCATCGTA；

所述的反向引物组由以下引物组成：

引物R15：其序列为SEQ ID NO：44所示的核苷酸序列，其中含有Index15：CTCTGCCT；

引物R17：其序列为SEQ ID NO：46所示的核苷酸序列，其中含有Index17：CCTACTAT；

引物R18：其序列为SEQ ID NO：47所示的核苷酸序列，其中含有Index18：CGATGCTG；

引物R19：其序列为SEQ ID NO：48所示的核苷酸序列，其中含有Index19：ATGCTAAT；

引物R21：其序列为SEQ ID NO：50所示的核苷酸序列，其中含有Index21：GCGTCTAT；

引物R25：其序列为SEQ ID NO：54所示的核苷酸序列，其中含有Index25：GGAGTCCT；

引物R26：其序列为SEQ ID NO：55所示的核苷酸序列，其中含有Index26：GCTCGAGC；

引物R27：其序列为SEQ ID NO：56所示的核苷酸序列，其中含有Index27：AAGGCATA；

引物R28：其序列为SEQ ID NO：57所示的核苷酸序列，其中含有Index28：ACTGCGGA；

引物R29：其序列为SEQ ID NO：58所示的核苷酸序列，其中含有Index29：AGGCGCTA。

2.如权利要求1所述的PCR引物，其特征在于：所述的PCR引物在使用时：所述的正向引物组中的任意一条引物和反向引物组中的任意一条引物两两配对组成引物对，通过PCR反应用于扩增样品中的ITS序列；获得的扩增产物的上游和下游各含有一个Index，这两个Index作为该样品的特异性标记，用于和其他待测序样品进行区分；所述的ITS序列指ITS1-ITS4这一区域的核酸序列。

3.权利要求1和2任意一项所述的用于构建土壤样品中真菌ITS序列多重测序文库的PCR引物在真菌多样性检测中的应用。

4.权利要求1和2任意一项所述的用于构建土壤样品中真菌ITS序列多重测序文库的PCR引物在制备真菌多样性检测试剂盒中的应用。

5.一种ITS序列多重测序文库构建试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含权利要求1和2任意一项所述的用于构建土壤样品中真菌ITS序列多重测序文库的PCR引物。

6.权利要求5所述的一种ITS序列多重测序文库构建试剂盒在土壤样品真菌多样性检测中的应用。