[发明专利]水痘带状疱疹病毒gE抗原及其在检测抗水痘带状疱疹病毒抗体中的用途

说明书

本发明公开了能够检测抗水痘带状疱疹病毒抗体、尤其是抗水痘带状疱疹病毒中和抗体的水痘带状疱疹病毒gE糖蛋白抗原，还公开了该抗原在制备检测抗水痘带状疱疹病毒中和抗体的检测试剂中的用途以及相应的检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及抗体的免疫检测领域，特别是抗水痘带状疱疹病毒抗体、尤其是中和抗体的免疫检测领域。

背景技术

水痘是由水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus， VZV)原发感染引起的疾病。水痘属于高传染性疾病，在世界范围流行性传播。水痘的易感人群主要是儿童，其特征为全身性疱疹并常伴有发热症状。对于绝大多数具有正常免疫能力的儿童而言，水痘属于一种良性的自限性疾病；但是对于因各种原因导致免疫功能低下的人群，VZV感染可能引起严重的、甚至是致命的疾病。研究表明，自然感染或免疫接种水痘减毒活疫苗后，机体可以再次被水痘病毒感染或激活而不产生任何临床症状，临床上二次感染水痘较罕见。

VZV属疱疹病毒科疱疹病毒亚科，为双链DNA病毒。VZV呈现为典型的脂质双层结构。基因组为线性双链DNA分子，由大约124884个碱基对组成，分子量为(80±3)×106道尔顿。该病毒基因组由71个开放读码框(ORF)组成，编码约69种蛋白质。基因产物按立即早期基因(IE)、早期基因(E)、晚期基因(L)顺序进行表达。L基因编码一些结构蛋白，如衣壳蛋白及糖蛋白。VZV病毒基因至少编码9种糖蛋白：gE、gB、gH、gI、gC、gL、gK、gM、gN，他们主要存在于病毒囊膜和感染细胞的细胞膜中，与病毒的致病性和免疫原性有着密切关系。

国内关于水痘方面的研究往往限于疫苗的研制和开发，而缺乏大范围人群正式使用后的评估。只有从病人及人群进行研究才能更好地对疫苗免疫效果进行评估，并且经临床试验证明有效的疫苗应继续进行上市后大规模人群应用后的研究，这样能得到真实的保护效果状况。随着接种水痘疫苗人数的增加，现在迫切需要一种快速、简便同时具有高灵敏度、高特异性优点的检测抗VZV抗体的方法，以此来判断接种疫苗后个体对VZV的敏感度以及对疫苗的免疫应答状况。目前检测VZV抗体的方法主要有酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay，ELISA)、兔抗糖蛋白抗体ELISA(gpELISA)、膜抗原荧光抗体测定(fluorescent antibody to membrane antigen assay，FAMA)、间接荧光抗体试验(indirect fluorescent-antibody technique，IFAT)、补体结合试验(CF)、免疫吸附血凝试验((immune adherence hemagglutination assay，IAHA)、放射免疫法(radioimmunoassay，RIA)、中和试验(ENT)、乳胶凝集试验(LA)等，其中最常用的是FAMA和ELISA法。

FAMA法是目前进行血清中抗体检测的金标准，是检测人群VZV抗体水平最佳的方法，可以较准确的确定免疫效果，已经成为评价其他方法的标准。FAMA法在VZV与其它疱疹病毒一起时，并不会出现交叉性反应，特异性良好，特别是在血清中抗VZV血清抗体水平比较低时灵敏度也较高，很适合用于疫苗免疫后血清学的评价。但FAMA法存在一些缺点，例如反应时间长，操作繁琐，不能实现自动化、标准化、不宜检测大批量样本，这使FAMA法不适合大批量的检测血清，无法广泛使用。

由于ELISA操作简单、快速，并且可进行大批量检测，因此它是目前使用最为广泛的方法。ELISA检测特异性 IgG抗体水平应用广，ELISA间接法具有方法简单、准确度高、无需特殊仪器等特点，通过包被纯化的表位抗原，以WHO VZV血清抗体参考品为标准品，建立了定量检测抗VZV中和抗体的 ELISA 方法。但目前市售的ELISA试剂盒采用的是全病毒抗原包被，因此敏感性较差。血清学方法检测VZV抗体对于易感人群的确定和鉴别、水痘疫苗免疫策略的研究以及疫苗免疫效果的评价具有重要意义。

发明内容