[发明专利]用于在恶性疾病的临床症状之前高达十年的早期癌症检测和癌症诊断的靶向二维免疫印迹分析的方法和组合物

权利要求书

1.一种用于检测受试者中的癌症的良性到恶性转化的组合产品，包括：

用于在电泳蛋白质分离之前收集来自受试者的样品的装置；

用于激活电泳分离的ENOX2转录变体的ENOX2电子供体；和

用于检测一种或多种激活的ENOX2转录变体的存在的泛-ENOX2可检测的结合试剂，其中样品中的一种或多种激活的ENOX2转录变体的存在表示癌症的恶性转化，其中所述ENOX2与泛-ENOX2可检测的结合试剂结合后保持其催化活性使得当与等价的未激活的ENOX2转录变体比较时，获得一种或多种激活的ENOX2转录变体的检测灵敏度的10至100倍的升高；其中，激活ENOX2转录变体所需的ENOX2电子供体选自还原型吡啶核苷酸、NADH、NAD(P)H或作为ENOX2电子供体的合成性底物中的至少一种；

所述泛-ENOX2可检测的结合试剂包括SEQ ID NO:11；

所述泛-ENOX2可检测的结合试剂包括SEQ ID NO:1的scFv，其中SEQ ID NO:11的scFv的稳定性、结合效率和有效期通过在防止聚集的50％的甘油中储存来改善；和/或

所述泛-ENOX2可检测的结合试剂包括抗-ENOX2 scFv融合蛋白，所述抗-ENOX2 scFv融合蛋白：在4℃至40℃下是非聚集的；包括包含间隔为CXXXXC或CXXXXXC的两个半胱氨酸C的氨基酸残基的小侧链Gly/Ser；和能够与ENOX2的蛋白质二硫键-巯基互换功能基序形成链间二硫键。

2.权利要求1所述的组合产品，其中，所述组合产品为试剂盒。

3.权利要求1或2所述的组合产品，其中，所述样品为血液、血清、血浆、尿液、脑脊髓液。

4.权利要求1或2所述的组合产品，其中，所述样品为体液。

5.权利要求1或2所述的组合产品，其中用于在2D印迹上检测一种或多种激活的ENOX2转录变体的装置，其中NADH或NAD(P)H的终浓度在10μM至50μM的范围内。

6.权利要求3所述的组合产品，其中用于在2D印迹上检测一种或多种激活的ENOX2转录变体的装置，其中NADH或NAD(P)H的终浓度在10μM至50μM的范围内。

7.权利要求4所述的组合产品，其中用于在2D印迹上检测一种或多种激活的ENOX2转录变体的装置，其中NADH或NAD(P)H的终浓度在10μM至50μM的范围内。

8.权利要求1、2、6或7任一项所述的组合产品，还包括：

用于进行二维(2D)电泳蛋白质分离的装置和用于杂交到膜或纸上的装置；

用于在临床症状前至少一年检测癌症的装置和/或用于确定人类癌症起源的组织的装置；

用于确定一种或多种未知原发灶的癌症(CUP)的起源的组织的装置；

用于筛选以下至少一种的装置：在具有家族癌症史、环境暴露的人群中或在一般人群中的早期癌症；

用于基于表1中描述的ENOX2转录变体的存在确定一种或多种激活的ENOX2转录变体的起源的组织的装置；

用于解析在53和/或79至85kDa下的蛋白质作为总蛋白质装载对照的装置；

用于基于一种或多种激活的ENOX2转录变体的存在区分远处转移和多原发性癌症的装置；

用于检测0期和1期癌症的装置和用于确定癌症的起源的组织的装置；和/或

用于监测癌症的再现的装置，其中两百万个或更少的癌细胞基于一种或多种激活的ENOX2转录变体的再现是可检测的。