[发明专利]一种首乌益智胶囊的指纹图谱测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种首乌益智胶囊的质量控制方法，具体涉及一种首乌益智胶囊的指纹图谱测定方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

首乌益智胶囊是由制何首乌、益智、黄芪等10种中药及提取物配伍，经特定加工提取工艺制成的中药胶囊剂。首乌益智胶囊全方通补结合，补而不滞，诸药配合，滋补温养精血，通行血脉, 具有补肾填精、化瘀通窍的功效，临床主要用于治疗肾精亏虚，瘀血阻络型血管性痴呆，能明显提高患者的认知能力、记忆能力和日常生活能力，有效改善中医临床症状，提高患者的生活质量。由于口服何首乌及其制剂有可能引起肝损伤的风险，本品所用为制何首乌，虽然制何首乌的风险低于生品，但不断提高其质量控制水平是保证产品质量均一、稳定的必要手段。

由于全球气候变暖、环境污染加剧、农药残留超标、品种退化及混杂等原因，中药原材料的安全稳定性已成为亟待解决的关键问题。中药指纹图谱能全面反映中药内在化学成分的品种与数量，进而反映重要的质量，现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确，采用中药指纹图谱的方式，将有效的表征中药质量，指纹图谱已经被国际社会所认可，有利于中药进入国际市场。指纹图谱为获得中药化学成分的谱图，具有特征性强、整体性和模糊性等特点，可以用于中药及中药制剂真伪、一致性和稳定性的评价。

中国专利CN103487516A提供了一种含有何首乌中药制剂的指纹图谱测定方法，该方法选用制剂中含有的成分做参照峰，并对方中的9个成分进行了指认，选用自身含有的成分做对照峰不能客观反应制剂中各共有峰成分的相对含量，虽然指认了9个成分，分别来源于4种药物，占方中药物比例低（全方共18种药物），不能全面反应和控制制剂质量；文献《何首乌配方颗粒的UPLC指纹图谱及化学成分归属》，该方法以何首乌配方颗粒为研究对象，进行了UPLC指纹图谱研究，指认了5个共有峰，在指纹图谱分析中采用自身含有的成分做对照，但该方法不能进行定量测定。

发明内容

本发明就是针对现有技术不能全面、客观、科学的评价首乌益智胶囊的质量的问题，提出的一种HPLC指纹图谱测定方法。该方法在成分复杂的样品溶液中定量加入一个内标，使建立的方法准确简便、灵敏度高、重复性好。

本发明是按照以下技术方案实现的：

本发明提供了一种首乌益智胶囊的指纹图谱测定方法，包括以下步骤：

（1）对照品溶液的制备：分别称取大黄素、大黄素甲醚、2 , 3 , 5 ,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA，丹酚酸B加75%甲醇溶解，其余对照品加甲醇溶解，分别制成对照品溶液；

（2）内标溶液的制备：称取汉黄芩苷，加入甲醇制成浓度为70µg/mL的内标溶液；

（3）供试品溶液制备：取首乌益智胶囊内容物粉末0.5g，加入75%甲醇25mL，回流提取，放凉，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液适量，加入浓度为75µg/mL的内标溶液，混匀，过0.45µm微孔滤膜，即得；

（4）利用高效液相色谱法进行分析测定。

进一步的，步骤（1）中，所述大黄素对照品溶液的浓度为10.26µg/mL、大黄素甲醚对照品溶液的浓度为9.68µg/mL、2 , 3 , 5 ,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液的浓度为64.08µg/mL、丹酚酸B对照品溶液的浓度为0.15mg/mL、丹参酮ⅡA对照品溶液的浓度为20µg/mL。

上述2 , 3 , 5 ,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、丹参酮ⅡA的对照品溶液需避光保存。

本发明回流提取的时间为30min，沸水浴条件下进行回流提取。

进一步的，步骤（3）中，所述续滤液同内标溶液的体积比为1∶1。

本发明所述的高效液相色谱分离使用Thermo Syncronis C18色谱柱：250 mm×4.6 mm，5 μm，在柱温30 ℃，流速1.0 mL/min；检测波长280 nm；进样量10 μL条件下，以体积分数为0.1%甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相C，进行梯度洗脱。