[发明专利]一种无菌液体细胞培养基的配置方法

说明书

技术领域

本方法涉及生物医疗领域的细胞培养液的配制方法。更具体而言，它着重于一种简单、现配现用、单人操作即可完成的小容量的无菌液体细胞培养液制备方法。主要适用于临床医学的个性化的自体细胞治疗方法。

背景技术

细胞治疗是目前世界上生物医学治疗发展的热点之一。基于人体自身免疫系统的原因，自体体细胞或干细胞治疗由于没有机体免疫排斥的原因，是应该是最早推进于临床应用的治疗方案，因此治疗中细胞培养用品的临床化、简单化、规范化是当前细胞治疗临床推广的重要课题之一。其中无菌细胞培养液及其相关用品的配置是重要的一个环节。目前，生物医药领域，无论是疫苗、抗体生产还是细胞治疗，无菌细胞培养液的生产都是采用干粉培养基溶解于去离子水中，碳酸氢钠调节PH值，然后进行过滤除菌分装的制备方法。此种方法制备过程繁琐、设备复杂、准备周期长；更主要的是制备好的无菌液体转运麻烦、贮存条件和空间要求严格，各种营养物质在保存期间就会发生降解，大量营养物质被自行消耗掉了。例如谷氨酰胺在液态4℃保存下，2周就会降解70%。针对目前广泛开展的自体细胞治疗技术，细胞培养液的配置应向临床应用过渡，其配置方法、操作习惯应该能够很快被临床医护人员所掌握，熟悉和应用。

发明内容

本发明提供了一种简单、方便、快捷的细胞完全培养基的配置方法。这种方法无须特殊的过滤装置，无须现有的临床医护人员接受专业的培训，仅需按照现有临床输液药物配置操作手法在百级超净台内操作，就能配制出合乎细胞培养要求的完全培养基。其主要内容是将原有细胞培养基的各组分在配置前选择、制备成无菌状态，然后在百级洁净台内，无菌操作下进行配置，方便现有医护人员在原有的操作习惯进行，便于细胞移植技术在临床的推广。

具体实施方式

本发明部分基于这样的认识：各种培养物质成分，包括葡萄糖、氨基酸、维生素、谷氨酰胺等物质，在干粉状态下要比在液体状态下更容易保持稳定，不容易降解。还进一步基于这样认识：上述各种营养成分经过辐射灭菌后，各种成分的活性不会丧失，或者有部分营养成分会丧失一定的活性，可以在整个培养基的原有的配比比例上予以适当调整，增加其占比得到弥补，从而达到原先采用先溶解后过滤制备的细胞培养基所能达到提供细胞体外所需要的良好的营养支撑需求。因为针对为临床应用的人体细胞疗法服务，各组分的选取应以临床广泛应用的现有药物为优选条件。基于如此考虑，本发明所采用临床广泛使用的灭菌注射用水作为溶剂；以减少常规制备培养基需要单独制备去离子水和三蒸馏水麻烦操作；也基于如此考虑，采用达到国家药物批准文号的粉末状碳酸氢钠予以分装合适剂量辐照后呈无菌状态，作为调节PH用;准备过程如下：

1.购买市售的具有国家药物批准文号的灭菌注射用水A;

2. 购买市售的具有国家药物批准文号的粉末状细胞培养基B，予以一定剂量分装于药用塑料瓶或玻璃瓶密封后，予以辐照灭菌;

3. 购买市售的具有国家药物批准文号的粉末状碳酸氢钠C，予以一定剂量分装于药用塑料瓶或玻璃瓶密封后，予以辐照灭菌;

4购买市售达到国家标准的胎牛血清D；

具体的配置在百级超净台内进行，过程如下：

a) 从液体部分A中无菌操作下用无菌注射器下密闭穿刺胶塞抽取适量注射用水加入粉末状部分B和C的中，适度摇晃将B和C充分溶解至透明状；

b) 将溶解后B、C无菌抽取转移至液体部分A中；

c) 将液体部分D无菌抽取转移至已经溶解B粉末、C粉末的A液中；

d) 以无菌封口输液贴封堵胶塞穿刺针眼,加盖外保护盖。