[发明专利]乌拉尔甘草水提物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制药技术，涉及医疗药草提取工艺，特别是乌拉尔甘草水提物及其制备方法与应用。

背景技术

疫苗主要通过体液免疫和细胞免疫发挥其特异性保护作用。疫苗免疫过程中，抗原递呈细胞吞噬疫苗抗原，并将其加工处理后，将抗原决定簇递呈给naïve T淋巴细胞，在抗原递呈细胞表达的共刺激分子及产生的细胞因子的共同作用下，naïve T淋巴细胞转化为致敏T淋巴细胞，进而转化为效应和记忆淋巴细胞。随后效应淋巴细胞识别携带有特异性抗原的靶细胞，在淋巴因子的辅助下对靶细胞发挥杀伤作用，破坏细胞膜使靶细胞破裂。在体液免疫过程中，T细胞依赖性抗原在巨噬细胞或吞噬细胞、T辅助淋巴细胞、细胞因子、补体分子等的作用下，或者非T细胞依赖性抗原在自身多个相同的抗原决定簇构成的链状抗原分子的作用下，活化B淋巴细胞，使后者增殖分化为浆母细胞和浆细胞，从而产生大量的非特异性IgM抗体和特异性IgG等抗体。

新型疫苗如DNA疫苗，具有安全性高、易操作、成本低廉等优势，能够诱导产生抗原特异性的细胞及体液免疫反应，用于研制预防性或治疗性的疫苗，应用前景广泛，如HPV16 DNA疫苗。由于DNA 疫苗免疫原性较弱，需要佐剂辅助才能诱导产生较强的保护性免疫反应。树突状细胞（dendritic cell；DC）疫苗（DC-based vaccine）为另一种具有应用前景的疫苗，DC是专职的抗原递呈细胞, 连接固有免疫系统和获得性免疫系统。DC可以识别、捕获和加工抗原, 并将抗原递呈给naïve T细胞, 激活抗原特异性的免疫反应。不成熟DC分布于机体外周组织, 同时具有很强的抗原吞噬能力，并通过表面或胞内受体如Toll样受体（Toll-like receptor, TLR）识别微环境的信号，成熟DCs表达趋化因子受体而获得迁移到淋巴结的能力, 把抗原递呈给naïve T细胞, 激活抗原特异性的免疫反应，其特征是增加了表面共刺激分子（CD40、CD80及CD86）、MHC分子以及促炎细胞因子的表达。DC的成熟状态决定了获得性免疫反应的强度和类型。大量临床试验表明，DC 疫苗不仅安全性高，而且能够诱导抗原特异性的细胞免疫反应。但DC疫苗的临床效果有待进一步的提高，其主要问题是DC在体外成熟度不够，表面功能分子表达及细胞因子分泌量不高，尤其是IL-12。目前使用的佐剂提高免疫反应的效果有限，且有些具有毒副作用，不适合临床应用。因此，急需开发新型、安全、高效的免疫佐剂增强疫苗的免疫原性，提高抗原特异性免疫反应，发挥疫苗良好的预防和治疗效果。

佐剂可以辅助抗原诱发机体产生长期、高效的特异性免疫反应，提高机体保护能力，同时又能减少免疫物质的用量，降低疫苗的用量及生产成本。佐剂本身不具抗原性，但与抗原一起或预先注入机体时可有效增强免疫应答的强度或改变免疫应答的类型。疫苗佐剂可延缓抗原的降解和排除，从而延长抗原在体内的滞留时间，避免频繁注射从而更有效地刺激免疫系统；刺激抗原递呈细胞，增强其处理和提呈抗原的能力；刺激淋巴细胞的增殖和分化，提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度；改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应。

佐剂种类繁多，然而，目前FDA批准用于临床应用的佐剂种类非常少，如铝化合物佐剂，而铝佐剂只能引起体液免疫，不能诱导机体有效的细胞免疫，存在着对某些小抗原免疫原性物质佐剂效果差，且结合抗原的能力批间差异较大的缺点，安全性、有效性不够理想。因此，寻找新的佐剂仍是提高疫苗免疫反应的重要任务。

中草药已经有几千年的临床应用历史，临床效果与其有效成分对机体的免疫调节作用，尤其是对抗原递呈细胞的成熟状态及功能的调节密切相关，其安全性得到了充分的验证，并具有多效性，无依赖性等特征，是筛选安全、高效佐剂的理想来源。

发明内容

本发明的目的在于提供一种乌拉尔甘草水提物及其制备方法与应用，乌拉尔甘草水提物能刺激DC成熟，提高蛋白疫苗、DNA疫苗及DC疫苗的免疫反应及抗肿瘤效果，利用水提、醇沉方法获得的GUWE（乌拉尔甘草水提物）在体外作用于小鼠BM-DC，证实GUWE能促进BM-DC成熟；它作为佐剂能够提高卵白蛋白（OVA）疫苗和HPV DNA疫苗在健康小鼠体内的免疫反应；在宫颈癌小鼠体内接种GUWE刺激成熟的HPV DC疫苗皆能有效抑制肿瘤生长及提高宫颈癌小鼠体内抗原特异性细胞免疫反应，增强HPV DC疫苗对肿瘤的治疗作用，GUWE可作为疫苗的有效佐剂使用。

本发明的目的是这样实现的：一种乌拉尔甘草水提物，由制备乌拉尔甘草水提物的方法制得。