[发明专利]基于微生物毒性快速筛检茶叶农药残留的方法

权利要求书

1.丁酸梭菌(Clostridium butyticum)WZMC1016在茶叶有机磷农药残留的筛检中的应用，所述丁酸梭菌WZMC1016的保藏号为CGMCC No.9831，所述有机磷农药为乐果或氧化乐果。

2.根据权利要求1所述的丁酸梭菌WZMC1016的应用，其中所述的茶叶有机磷农药残留的筛检包括下列步骤：

(1)筛检培养基制备：

蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，乙酸钠5g，K₂HPO₄2g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，MnSO₄·4H₂O 0.2g，低聚果糖3g，柠檬酸二铵2g，吐温-80 1mL，琼脂15g，蒸馏水1L，将以上成分加热溶解校正pH 6.5，115℃高压灭菌15-20分钟；

(2)菌悬液制备：

丁酸梭菌WZMC1016接种于营养琼脂的斜面培养基，35±2℃厌氧培养24小时，用灭菌生理盐水将菌苔洗下，制成悬液，在721分光光度计580nm波长下将光透过率控制为0.7，置2～8℃冰箱中保存；

(3)菌层培养基制备：

取直径90mm、高16～17mm的平板，注入加热融化的步骤(1)筛检培养基20mL，使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层；在已凝固的底层培养基上加入步骤(2)菌悬液0.5mL，充分混匀，使在底层上均匀摊布，作为菌层；

(4)样品前处理：

取待检的茶叶样品匀浆组织5g，用无菌1％pH 6.0磷酸盐缓冲液20mL稀释，漩涡混匀，于80℃水浴加热5min，冷却后于5000r/min离心15min，取上清液作为供试样品液；

(5)样品测定：

在步骤(3)菌层筛检培养基的培养皿中放置直径13±1mm圆滤纸片，用镊子轻压纸片，使纸片与培养基紧密接触，用微量移液器在圆滤纸片上滴加步骤(4)供试样品液90μL，每个供试样至少重复2个培养皿，35±2℃厌氧培养18～24小时，抑菌圈直径通过抑菌圈电脑测量分析仪测量；

(6)结果判定：

当抑菌圈≥16mm，判断茶叶样品中有机磷农药残留阳性(+)。