[发明专利]一种麦胚抗肿瘤活性蛋白的修饰方法

说明书

本发明涉及一种麦胚抗肿瘤活性蛋白的修饰方法，属于抗肿瘤产品制备技术领域；具体包括如下步骤：（1）在室温下，将麦胚蛋白10~15g加入200~300mL磷酸盐缓冲溶液中稀释，然后加入1~2g Na²¹¹At，0.1～0.2g 5‑三甲基锡‑3‑吡啶甲酸N‑琥珀酰亚胺酯，搅拌均匀；升温到30～35℃，加入0.1～0.2 mL过氧化物酶，反应10~20min；（2）在步骤（1）的反应液中加入0.5mmol/L偏重亚硫酸钠水溶液5～10mL终止反应；（3）将反应液过Sepadex G50柱层析，用0.1mol/L，pH7.0的磷酸缓冲溶液洗脱，紫外检测后，收集洗脱峰即得麦胚抗肿瘤活性蛋白；通过本方法制备的麦胚活性蛋白对癌细胞增殖以及迁移有明显抑制作用，抗癌效果好，可用于制备抗癌药物和保健食品。

技术领域

本发明涉及一种麦胚活性蛋白的修饰方法，具体涉及一种麦胚抗肿瘤活性蛋白的制备方法，属于抗肿瘤产品制备技术领域。

背景技术

恶性肿瘤是危害人类生命和健康的严重疾病，作为20世纪最伟大的科技成就之一，青霉素的发现及临床应用开创了天然产物的新篇章。随着基因组研究、生物信息学及生物技术的进步大大促进了该学科的发展，目前在肿瘤化疗中源于天然产物的药物已超过50％。进入新世纪以来，生命科学的进步及对传统学科的反思使得人们对于天然产物有了新的认识，从植物中寻找有效的抗肿瘤药物并进行有效生物合成已成为国内外药学研究者的热点研究课题。

中国作为小麦面粉消费大国，胚芽的产量很可观。如果将小麦胚磨入面粉中，会对面粉的色泽、保质期以及焙烤性质产生不利影响，而目前对小麦胚的研究、开发还不够深入，仅停留在营养源水平上。对小麦胚更深层次的应用缺乏理论支持，这直接影响着制粉行业的效益，造成宝贵资源的极大浪费。随着人们对小麦胚中各种生理活性物质研究的深入，小麦胚的抗肿瘤活性得到越来越多的关注。首先，小麦胚发酵提取物的抗肿瘤活性研究最多，在有些发达国家小麦胚发酵提取物已经被商业化生产和应用。其次，小麦胚黄酮类提取物、麦胚凝集素、脂溶性提取物和水溶性提取物的抗肿瘤活性研究也取得了初步进展，这些物质的抗肿瘤活性研究主要是通过动物实验和体外细胞培养的方式进行的，已经证明了小麦胚具有潜在的抗肿瘤活性。

周会会(小麦胚芽抗肿瘤活性蛋白的分离纯化及抗肿瘤活性研究，中国油脂，2013，38(11)：23～27)对小麦胚芽进行研究，将小麦胚芽水溶性提取物硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析、Superdex200凝胶柱层析，分离得到抗肿瘤活性蛋白WGWSP11。体外抗肿瘤实验结果显示，WGWSP11对人乳腺癌细胞株MDA-MB231、人胃癌细胞株SGC-7901和人结肠癌细胞株HT-29的细胞存活率均有不同程度的影响。由此可知，小麦胚蛋白具 有抗肿瘤活性，但是由于蛋白质类生物大分子不如小分子稳定，极易受温度、pH等因素的影响，而使空间排列变得无序，最后变性失活，而且其抗肿瘤的机理很大可能是增强了免疫力，对于杀死或抑制肿瘤细胞增殖的效果不明显。鉴于此不足，对蛋白质分子进行生物修饰，可有效提高其抗肿瘤效果。

砹(At)为重卤族元素，无稳定同位素。1940年由Corson DR等用30MeV的α粒子轰击Bi靶时第一次获得，有二十余种同位素。其中，²¹¹At半衰期为7.2h，每次衰变发射一个α粒子和6.3个俄歇电子。就放射治疗而言，它是除硼中子俘获治疗外仅有的高传能线密度(LET)体系，与辐射治疗的最佳值(100Kev/μm)非常接近。具有极强的细胞毒性，所引起的DNA链断裂是不可修复的，而且它的辐射毒性几乎和剂量率、细胞分裂周期和氧浓度无关。同时它的亚细胞射程(μm)的俄歇电子，在细胞内有非常高的LET效应，能打断DNA链，致死癌细胞。在可用于肿瘤治疗的核素中，从放射生物学的观点来看，²¹¹At是最有希望的核素之一。用²¹¹At标记小麦胚蛋白将显著增强其抗肿瘤效果，目前还没有该方面的报道。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供一种麦胚活性蛋白的修饰方法及其应用，对蛋白质分子进行生物修饰，对癌细胞增殖以及迁移有明显抑制作用，抗癌效果好。