[发明专利]一种平菇菌种鉴别的方法及专用DNA条形码片段

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及DNA条形码快速鉴别食用菌菌种，尤其涉及一种平菇菌种鉴别的方法及专用DNA条形码片段。

背景技术

食用菌是我国主要的经济作物和出口农产品。我国食用菌产业经过30多年高速发展，2014年产量已超过2800万吨、产值超过2000亿元，已成为世界上最大的食用菌生产大国。其中平菇产量最大，达560万吨，居世界第一。菌种质量好坏对食用菌产业发展十分重要。食用菌产业有“一支母种影响一个食用菌产业”的说法。菌种在平菇产业的发展中起着重要的、不可替代的作用。近年来菌种事故多数是菌种错误造成的，菌种随意改名，假冒伪劣菌种扰乱市场，坑农时间时有发生。因此，菌种的真实性检测在平菇菌种质量检测中显得至关重要。

常规检测手段主要有：肉眼感官观察、菌丝生长速度、农艺性状和商品性状检验、同工酶电泳法、ISSR法等。这些方法耗时多，具有一定的组织与发育阶段的特异性，结果不可靠。

DNA条形码技术是利用一段标准、通用的DNA序列，实现对物种进行快速准确鉴定的目的。该技术鉴定样品具有不受其生长发育阶段影响、所需材料少，操作简单，所需时间短，结果可靠等优势，可以实现对平菇菌种快速可靠的物种鉴定。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种DNA片段。

本发明提供的DNA片段，为如下1)或2)或3)：

1)、序列3所示的DNA片段；

2)、序列3第21-375位核苷酸所示的DNA片段；

3)、为与1)或2)所示片段的核苷酸序列同源性大于99％的片段。

本发明的另一个目的是提供所述DNA片段的新用途。

本发明提供了所述DNA片段在鉴别或辅助鉴别平菇菌种中的应用。

本发明第3个目的是提供检测平菇菌种基因组中是否含有所述DNA片段的物质的新用途。

本发明提供了检测平菇菌种基因组中是否含有所述DNA片段的物质在鉴别平菇菌种中的应用。

上述应用中，所述检测平菇菌种基因组中是否含有所述DNA片段的物质为如下1)或2)：

1)用于扩增所述DNA条形码片段的引物对；

2)含有所述引物对的PCR试剂或试剂盒。

上述应用中，所述引物对由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成。

或所述PCR试剂中，所述引物1和所述引物2的摩尔比为1:1。

或所述PCR试剂中，所述引物1和所述引物2的浓度均为10μmol/L。

本发明第4个目的是提供一种鉴别或辅助鉴别平菇菌种的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：检测待测样品中是否含有所述DNA片段；如果含有，则待测样品为或候选为平菇菌种；如果不含有，则待测样品不为或候选不为平菇菌种。

上述方法中，

所述检测待测样品中是否含有所述DNA片段的方法包括如下步骤：

1)用序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成的引物对对待测样品进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

2)测序所述PCR扩增产物，将所述PCR扩增产物的序列与所述DNA片段进行比对，若同源性大于99％，则待测样品中含有所述DNA片段，若同源性小于等于99％，则待测样品中不含有所述DNA片段。

上述方法中，

所述PCR扩增的模板为待测样品的基因组DNA。

本发明第5个目的是提供检测平菇菌种基因组中是否含有所述DNA片段的物质。

本发明提供的检测平菇菌种基因组中是否含有所述DNA片段的物质，其为如下1)或2)：

1)用于扩增所述DNA条形码片段的引物对；

2)含有所述引物对的PCR试剂或试剂盒。

上述物质中，所述引物对由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成。

或所述PCR试剂中，所述引物1和所述引物2的摩尔比为1:1。

或所述PCR试剂中，所述引物1和所述引物2的浓度均为10μmol/L。

为克服形态特征、生化及传统分子标记鉴定平菇菌种的缺陷，本发明提供了一种平菇(Pleurotus cornucopiae，白黄侧耳，又名小平菇、美味侧耳、紫孢平菇、平菇)菌种DNA条形码鉴定方法，可以快速准确地鉴别平菇菌种。