[发明专利]胶乳增强免疫比浊法检测心型脂肪酸结合蛋白的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，特别涉及一种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，还涉及所述心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法。

背景技术

心型脂肪酸结合蛋白(hFABP)是心脏中富含的一种新型小胞质蛋白。它具有高度心脏特异性(也就是主要在心脏组织中表达)，但在心脏以外的组织中也有低浓度表达。心肌缺血性损伤出现后，hFABP可以早在胸痛发作后1-3小时在血液中被发现，6-8小时达到峰值而且水平在24-30小时内恢复正常。心脏脂肪酸结合胞质蛋白由132个氨基酸组成，分子量为15kDa。

hFABP在血清中的正常范围根据试验和方法而定。1991年，Tanaka等人报告正常范围为0.0-2.8ng/mL；1991年，Tsuji等人报告正常范围为0.0-0.6ng/mL，而1997年，Wodzig等人认为正常范围是0.3-5ng/mL。1995年，Ohkaru等人报告100位健康受试者的男女平均血清hFABP水平分别为3.60±1.73和3.73±1.92ng/mL。在近期Hasegawa等人的报告中，儿童的基线血清hFABP水平与以前报道的成人基线血清hFABP水平一致(平均值＝3.8，范围＝1.9-5.5ng/mL)。在不同研究中临界浓度不同，从6.2ng/mL到19ng/mL。生理血清hFABP浓度很可能由损坏的骨骼肌细胞不断释放这种蛋白质引起。

用两种hFABP特异性单克隆抗体通过夹心酶联免疫吸附法测定血清hFABP浓度。可以用全血样本进行一步免疫色谱分析法来快速测量hFABP；获得血清hFABP水平定性数据需要15分钟。利用面板试验，初步结果显示对AMI检测的灵敏度高(93％)但是特异性低(43％)。现有技术中还有免疫比浊测定、免疫传感器法等测定方，这些方法具有操作繁琐、耗时长、过度浪费资源的缺点，不适于常规检验。

现有技术中，还有一种胶乳增强免疫比浊法，是公认的特异性和灵敏度较高的检测方法。如公开号为CN 102788880 A的中国发明专利申请，公开了一种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其组成为试剂R1、试剂R2，其中试剂R1包括：200-220mmol/L Tris缓冲液、5-10mmol/L聚乙二醇、1-5mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白；b、试剂R2：200-220mmol/L Tris缓冲液、结合有心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、1-5mmol/L吐温-20、0.5-3mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白。试剂R2中的心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的乳胶粒子中的乳胶颗粒直径50-100nm。但此专利申请中并没有公开其检测灵敏度、特异性等性能，使本领域技术人员无法预测其检测效果。

发明内容

为了解决以上现有技术中存在的心型脂肪酸结合蛋白检测中存在的操作繁琐、耗时长、过度浪费资源、检测灵敏度特异性不理想的问题，本申请提供了一种检测方便易操作、时间短、灵敏度高、稳定性好、特异性强的心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒。

血清中的心型脂肪酸结合蛋白与试剂中的胶乳包被的特异性抗体相结合，形成抗原抗体复合物产生混浊，在一定的抗体浓度范围内,其浊度高低与血清心型脂肪酸结合蛋白含量成正比。通过测定在700nm波长的吸光度值，根据多点定标曲线即可求出血清中心型脂肪酸结合蛋白的含量。

本申请还提供了所述心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法。

本发明是通过以下措施实现的：

一种胶乳增强免疫比浊法检测心型脂肪酸结合蛋白的试剂盒，含有试剂R1和试剂R2，其中

试剂R1中含有以下组分：

Tris缓冲液 120mmol/L，

聚乙二醇对异辛基苯基醚 20mmol/L，

pH为7.0-8.0，

试剂R2中含有以下组分：

鼠抗人心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体乳胶粒子4.5g/L，

pH值为7.0-8.0，

所述鼠抗人心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体乳胶粒子中乳胶颗粒中，直径10-30nm的乳胶颗粒占总体积的10-30％，30-60nm的乳胶颗粒占总体积的40-60％，60-100nm的乳胶颗粒占总体积的20-30％，

试剂R1与试剂R2体积比为4：1。