[发明专利]一种高耐药性Huh-7-DN肝癌细胞株

说明书

本发明属微生物动物细胞系领域，涉及一种具有高耐药性的人肝癌细胞株Huh‑7‑DN及其建立方法，其保藏编号：CGMCC No.12253。本细胞系为人源性细胞，与其亲本细胞相比，具有以下生物学特性：流式细胞鉴定结果显示其稳定表达CD133/EpCAM双阴性的细胞表面分子标记；呈现上皮细胞间质转化（EMT）特征、高豪猪信号活性和高耐药的特点，并高表达多药耐药相关ABCC1转运蛋白。本发明所述的具有高耐药性的人肝癌细胞株Huh‑7‑DN可作为人肝细胞癌多药耐药的研究细胞模型，其具有独特的分子生物学特性、异质性、多态性，有助于应用在揭示人肝细胞癌的耐药机制和化疗药物的筛选。

技术领域

本发明属微生物动物细胞系领域，具体涉及一种具有高耐药性的人肝癌细胞株Huh-7-DN及其建立方法。

背景技术

资料显示，肝细胞癌（HCC）是第三致命的和第五常见的恶性肿瘤，全球每年有超过70万的新发病例。有研究报道，慢性乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染、非酒精性脂肪性肝炎及其他肝病是HCC的发病基础。据调查，我国是HCC的高发地区，每年约有30万的新发病例，占全球新发病例的一半。手术切除和肝移植是目前治疗HCC的有效手段，但是，实践显示，大部分患者发现HCC时已处于中晚期，已无手术治疗的指征；由于HCC对传统的细胞毒性化疗药物相对耐药，因此，作为备选的非手术疗法——化疗的疗效和5 年生存率均不理想，其中仅有Raf-1激酶抑制剂，索拉非尼能延长进展期HCC患者的中位生存期数月；但原发和继发耐药及远处转移，仍是造成进展期患者高死亡率的主要原因。HCC的高发病率和高死亡率不仅使患者承受极大的痛苦，同时治疗所产生的费用也给患者家庭带来极重的经济负担，因此研究HCC化疗耐药的机制，寻找改善化疗敏感性的治疗途径显得尤为重要，而建立稳定、可靠的高耐药性肝癌细胞株则是当务之急。

现有公开的可用于研究肝癌细胞耐药性的细胞株包括有Hep3B、Huh-7、HepG2、HLE和HLF等，本发明的前期研究发现，根据表面分子标记CD133和EpCAM的表达，可将人肝癌细胞株分成双阳性和双阴性两种亚群，其中，CD133和EpCAM双阴性表达的肝癌细胞中豪猪信号通路异常活化。与低豪猪信号活性的肝癌细胞相比，高豪猪信号活性的肝癌细胞对于顺铂、多柔比星和索拉非尼相对耐药；研究还公开了通过检测人肝癌细胞株Hep3B、HepG2、Huh-7、HLE、HLF和SKHep1中CD133和EpCAM的表达谱，发现Huh-7细胞中CD133和EpCAM双阳性和双阴性亚群的数量相近，而HepG2、HLE、HLF和SKHep1细胞中双阴性亚群占70%以上。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种具有高耐药性的人肝癌细胞株，尤其是一种高耐药性Huh-7-DN肝癌细胞株及其建立方法。

与本发明有关的参考文献有：

[1] El-Serag HB, Rudolph KL. Hepatocellular carcinoma: epidemiologyand molecular carcinogenesis [J]. Gastroenterology 2007;132:2557-76.

[2] Tanaka S, Arii S. Molecularly targeted therapy for hepatocellularcarcinoma [J]. Cancer Sci 2009;100:1-8.

[3] Chen X, Lingala S, Khoobyari S, Nolta J, Zern MA, Wu J.Epithelial mesenchymal transition and hedgehog signaling activation areassociated with chemoresistance and invasion of hepatoma subpopulations [J].J Hepatol 2011;55:838-45.。

发明内容