[发明专利]翻白草三萜化合物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种翻白草三萜化合物的制备方法。

背景技术

中药翻白草是蔷薇科委陵菜属植物翻白草(Potentilla discolor Bunge)的干燥全草，始载于《救荒本草》。翻白草广泛分布于北半球的温带和寒带，我国以山东、辽宁、安徽三省该药材产量最大，此外，河北、河南、内蒙古、湖南、江苏和广西等省份也有分布。其性甘、苦、平，具有清热解毒、止血消肿之功效，可用于治疗痢疾、疟疾、肺痈等症。

目前国内外对翻白草的研究集中于单一环节的疗效评价方面，针对翻白草的化学成分、提取工艺、药效物质基础、物质代谢的系统性研究开展较少，有待进一步深入。

发明内容

发明人对翻白草(Potentilla discolor Bunge)的化学成分、提取方法、药理活性进行了系统研究。从翻白草提取分离出10个三萜类化合物(化合物1～10)。其中,化合物5为新化合物，经结构鉴定，命名为(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸，其结构如式(I)所示：

本发明还研究了翻白草总三萜的提取方法以及式(I)所示三萜化合物的提取方法。

即，本发明提供一种式(I)所示的三萜化合物的提取方法，包括：

(i)粗提工序：干燥翻白草(Potentilla discolor Bunge)全草，用70体积％以上的乙醇水溶液加热提取，减压蒸去乙醇，得到粗提物；

(ii)萃取工序：用水混悬上述粗提物，依次经石油醚萃取、乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取部分；

(iii)柱层析工序：先将上述乙酸乙酯萃取部分进行硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱，收集30-50体积％氯仿-甲醇的洗脱流分；

接着进行小孔树脂柱层析，甲醇-水梯度洗脱，收集70-90体积％甲醇水洗脱的流分；

然后进行反相C18柱层析，丙酮-水梯度洗脱，收集50-70体积％丙酮-水洗脱的流分；

(iii)纯化工序：用葡聚糖凝胶柱纯化，得到式(I)的化合物。

本发明还提供一种翻白草总三萜的提取方法，所述翻白草总三萜是包含式(I)所示的三萜化合物的混合物，该提取方法包括：

干燥翻白草(Potentilla discolor Bunge)全草，用90体积％乙醇水溶液加热提取，提取液蒸去乙醇，用水混悬，依次经过石油醚萃取、乙酸乙酯萃取；

将乙酸乙酯萃取部分硅胶柱层析，用体积比1:0-0:1的氯仿-甲醇梯度洗脱，收集30-50体积％和50-70体积％的氯仿-甲醇的洗脱流分；

进行小孔树脂柱层析，甲醇-水梯度洗脱，收集70-90体积％甲醇水洗脱的流分。

附图说明

图1为翻白草提取分离过程示意图；

图2-1、2-2为(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸¹H NMR谱图；

图3-1、3-2、3-3为(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸¹³C NMR谱图；

图4-1、4-2为(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸2D-NMR谱图；

图5-1、5-2、5-3为(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸ROESY谱图。

具体实施方式

(一)化合物的提取

1、实验方法

1.1实验仪器与材料

熔点用X-4型双目镜显微熔点测定仪(温度未校正，北京泰克仪器有限公司制造)测定；UV用Shimadzu UV-2501PC型可见-紫外分光光度计测定；NMR：Bruker AV-500型核磁共振仪，δ为ppm，J为Hz。

薄层层析硅胶H、薄层色谱硅胶GF₂₅₄、柱层析硅胶(100-200目，200-300目，青岛海洋化工厂)；反相C18柱，即ODS柱(40-60μm，Fuji公司)，Sephadex LH-20葡聚糖凝胶(购自Pharmacia公司)；MCI柱(日本三菱化工株式会社)。

所用试剂均为分析纯级。

如无特殊说明，本发明所指比例以及百分比均指体积。

1.2植物来源

翻白草(Potentilla discolor Bunge)药材采自广西，植物标本经鉴定为蔷薇科委陵菜属植物翻白草，标本存放于中国药科大学中药分析教研室。

1.3提取分离