[发明专利]抗卵巢抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外检测领域，尤其涉及一种抗卵巢抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

抗卵巢抗体( a n t i o v a r i a n a n t i b o d ie s ，A O A b ) 是一种以卵巢内卵母细胞、颗粒细胞等的胞浆成份为靶抗原的自身抗体，在卵巢早衰患者中有很高的检出率。最早从Addison 's病或多种内分泌缺陷的病人中检测到，后在卵巢早衰、内膜异位、SLE、不孕症患者中也观察到。

抗卵巢抗体的产生可影响卵巢和卵泡的发育和功能。所以现在很多不孕不育症都是由于抗卵巢抗体而造成的，所以抗卵巢抗体测定对治疗不孕不育病来说非常重要。

目前临床检测抗卵巢抗体的常见方法有酶联免疫吸附法、酶促化学发光法，但这些方法都存在着一些不足之处。

一、酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法(ELISA) 被广泛应用，但该方法也存在着下述的不足之处：

(1) 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96 孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12 批次、6 批次、8 批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；

(2) 定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；

(3) 缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；

(4) 检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确性；

(5) 检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差；

(6) 在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数×48/96人份，如果需要检测10 个项目，则试剂的配置及使用数须为10×48/96人份，如果只有一份样本需要检测10 个不同的项目，也需要配置10×48/96人份的试剂，存在着不够经济合理的缺点。

二、化学发光法

化学发光法按发光原理可分为直接化学发光和酶促化学发光。

酶促化学发光主要有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶两种，但都有一定的局限性，辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H2O2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。碱性磷酸酶主要缺点为：底物达到平台期的时间长，底物成本高，导致检测成本高，患者负担重。

吖啶酯作为标记物的直接化学发光相比酶促化学发光具有明细优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，可以两点定标，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。

发明内容

基于此，有必要提供一种检测灵敏度较高的抗卵巢抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

一种抗卵巢抗体化学发光免疫检测试剂盒，包括：抗卵巢抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。

在一个实施例中，所述抗卵巢抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述抗卵巢抗体重组蛋白与所述羧基化的磁微粒的比例为1：25~35。

在一个实施例中，所述抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物中，所述抗人免疫球蛋白与所述化学发光标记物的比例为50：1~10。

在一个实施例中，所述羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。

在一个实施例中，所述化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。

在一个实施例中，还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液。

在一个实施例中，所述A液为H₂O₂溶液，所述B液为NaOH溶液。

在一个实施例中，还包括抗卵巢抗体定标品。

在一个实施例中，所述抗卵巢抗体定标品为浓度分别为1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的抗卵巢抗体的溶液。