[发明专利]生物补片的制备方法

权利要求书

1.一种脱细胞肌腱和小肠浆膜组织作为生物补片的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)取猪的肌腱，清除肌腱表面的外膜和滑膜组织；取猪的空肠和回肠用水冲洗干净，钝性刮除小肠粘膜、粘膜下层和肌层，仅留下浆膜纤维层，用PBS漂洗干净；

(2)肌腱和小肠浆膜纤维层脱细胞过程中全程使用一种保护肌腱和小肠浆膜结构的保护液；

(3)采用高静压技术预分离肌腱和小肠浆膜组织内的细胞，通过物理的方法将肌腱和小肠浆膜结构内的细胞松解和破碎；

(4)采用复合核酸酶方法消化残余细胞核；

(5)利用去垢剂脱除松散破碎细胞片；

(6)用保护液对肌腱和小肠浆膜进行漂洗；

所述保护液的成分为：DMEM细胞培养基粉末5-10g/L、L-组氨酸盐酸盐2.87-3.83g/L、硫酸软骨素25-30g/L、低分子右旋糖酐20-35g/L、羟丙基甲基纤维素2-8g/L、别嘌呤醇0.5-0.8g/L、HEPES缓冲液20-25ml/L、盐酸地塞米松1-2mg/L、还原型谷胱苷肽1.5-3g/L以及左氧氟沙星0.1-0.2g/L；

所述高静压技术所采用的条件为200-400MPa，高静压频率为2-5次，每次为1～2分钟。

2.如权利要求1所述的制备方法，获取的成年猪肌腱和小肠浆膜，经处理清洗，制为1～3cm×3～5cm大小的补片备用。

3.如权利要求1所述的制备方法，其中所述保护液的pH值为7.2-8.0，渗透压为300-400mOsm/kgH₂O。

4.如权利要求1所述的制备方法，其中所述复合核酸酶，DNA酶的浓度为100-2000U/ml，核酸酶的浓度为100-2000U/ml，DNA酶或核酸酶的脱细胞核时间为1-4小时，处理温度为15-30摄氏度。

5.如权利要求1所述的制备方法，其中所述去垢剂Triton X-100的浓度为0.5-8％，去垢剂使用时间为1-4小时。

6.如权利要求1所述的制备方法，其中肌腱和小肠浆膜在保护液中漂洗的时间为0.5～4小时。

7.如权利要求1所述的制备方法，制备完成的肌腱和小肠浆膜补片需贴附在硝酸纤维素膜上，放入无水氯化钙分子筛内脱水，再装袋密封并标记后经钴60照射灭菌，以4℃保存备用。

8.如权利要求1所述的制备方法，在临床使用前将保存的肌腱和小肠浆膜补片放入4000u的妥布霉素生理盐水溶液浸泡10分钟。