[发明专利]改性心磷脂包被的纳米磁珠及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外检测领域，尤其涉及一种改性心磷脂包被的纳米磁珠及其制备方法。

背景技术

抗心磷脂抗体是一种能与多种含有磷脂结构的抗原物质发生反应的抗体，抗原为参与多种细胞膜组成的带负电荷的磷脂成分。临床上主要存在于抗磷脂综合征、各种自身免疫性疾病和梅毒感染患者体内。

抗磷脂综合症(APS)包括多种自身性免疫性疾病，多见于年轻人，男女发病比率约为2：8。患者可出现一种或多种表现，可累及多个系统、器官，主要有：静脉和动脉血栓形成、血小板减少症、习惯性流产、心肌病、心脏病、大脑和肾脏梗塞、肺高压。恶性APS可表现为短期内进行性广泛血栓形成，造成多器官功能衰竭甚至死亡。可继发于系统性红斑狼疮或者其它自身免疫病，但也可单独出现(原发抗磷脂综合征)。

梅毒患者体内也能产生抗磷脂抗体，梅毒是由螺旋体细菌梅毒密螺旋体引起的性传播疾病。据报道，每年有超过5百万人感染梅毒，其中包括通过先天性传染的3万名婴儿。梅毒可于患者体内潜伏和隐藏许多年，并可导致各种各样的临床表现。其中处于梅毒隐藏期的患者并无临床症状，次阶段在约三分之二未治疗病人中持续终生。感染者在隐藏期不具有传染性，然而处于隐藏期的母亲所生的孩子可能感染先天性梅毒。

抗磷脂抗体检测试验被广泛应用于磷脂综合征诊断以及梅毒的非密螺旋体试验。该检测具有廉价、快速和方便对大量样本执行的优点。此外，由于抗磷脂抗体的浓度会随着梅毒的治疗成功而逐渐降低，而梅毒感染的特异性抗体密螺旋体抗体会持续数年甚至终生都高。因此抗磷脂抗体检测试验被认为是监测梅毒治疗的更好选择。

传统的检测抗磷脂抗体的主要方法是将心磷脂用物理吸附的方式涂抹在特定的固体如酶标板上面，然后利用附着在酶标板上面的心磷脂与待检测样本中的抗磷脂抗体结合，实现对样本中的抗磷脂抗体的捕获。通过对捕获的抗磷脂抗体显色并测定发光浓度，就能间接的读取样本中的抗磷脂抗体浓度。

由于用物理吸附方式固定的心磷脂在溶剂、加热等外部条件影响下容易从固体板上解离和脱落，因此通过该方法制备的检验产品的稳定性较差。

发明内容

基于此，有必要提供一种用于检测抗心磷脂抗体的稳定性较好的改性心磷脂包被的纳米磁珠及其制备方法。

一种改性心磷脂包被的纳米磁珠，包括：改性心磷脂、生物素衍生物和链霉亲和素磁珠；

所述改性心磷脂为心磷脂的疏水性脂肪酸侧链被氧化并氨基化得到，所述改性心磷脂含有-NH₂；

所述生物素衍生物的结构式为：其中，所述-R-为含有4个～20个碳原子的饱和烷基链或含有2个～10个碳原子的聚乙二醇链，所述改性心磷脂中的-NH₂与所述生物素衍生物中的-COOH生成-NH-CO-结构从而将所述改性心磷脂和所述生物素衍生物连接到一起；

所述链霉亲和素磁珠为结合了链霉亲和素的纳米磁珠，所述生物素衍生物和所述链霉亲和素连接。

在一个实施例中，所述-R-为含有4个～10个碳原子的饱和烷基链。

在一个实施例中，所述改性心磷脂含有一个-NH₂。

在一个实施例中，所述改性心磷脂的结构式如下：

一种上述的改性心磷脂包被的纳米磁珠的制备方法，包括如下步骤：

将心磷脂和过氧化物在第一溶剂存在的条件下充分反应，得到中间产物；

向所述中间产物中加入过量氨水并充分反应，得到改性心磷脂，其中，所述改性心磷脂的疏水性脂肪酸侧链被氧化并氨基化，所述改性心磷脂含有氨基；

将所述改性心磷脂和N-羟基丁二酰亚胺活化的生物素衍生物在第二溶剂存在的条件下充分反应，得到生物素衍生物结合的改性心磷脂，其中，所述生物素衍生物的结构式为：其中，所述-R-为含有4～20个碳原子的碳链或含有2～10个碳原子的聚乙二醇链，所述改性心磷脂中的-NH₂与所述生物素衍生物中的-COOH生成-NH-CO-结构从而将所述改性心磷脂和所述生物素衍生物连接到一起生成所述生物素衍生物结合的改性心磷脂；以及

将所述生物素衍生物结合的改性心磷脂和链霉亲和素磁珠混合并充分反应，得到改性心磷脂包被的纳米磁珠，其中，所述链霉亲和素磁珠为结合了链霉亲和素的纳米磁珠，所述生物素衍生物和所述链霉亲和素连接。