[发明专利]腺病毒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外检测领域，尤其涉及一种腺病毒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

人腺病毒（(Human adenoviruses，HAdV)属于腺病毒科哺乳动物腺病毒属，为双链 DNA病毒，可导致呼吸道、消化道感染，感染较为普遍。腺病毒是无包膜病毒，在低 pH 值环境下可稳定存在，有很强的耐物理和化学试剂的作用的能力，腺病毒可对胃肠分泌物和胆汁产生耐受，因此腺病毒可在胃肠内复制，产生很高的病毒载量。腺病毒常在咽、结膜、肠道及淋巴组织内繁殖，并导致各种各样的临床症状，比如呼吸系统的感染、结膜炎、胃肠炎、肝炎、出血性膀胱炎、神经系统的紊乱等。

目前腺病毒检测常用方法为细胞培养法，血吸附法，免疫荧光法进行检测，但这些方法存在敏感度低，检测周期长，检测精度低，结果判定易受多种因素影响，客观性不足，劳动量大等问题 ；常规 PCR 检测法虽然敏感性、稳定性、特异性较好，但容易污染，造成假阳性结果 ；已有的荧光定量 PCR 法虽然克服了上述方法的缺陷，但是仅能检测牛腺病毒 3 型，具有检测的局限性，并且仅能够进行牛腺病毒的定性检测，无法定量，检测特异性、灵敏度、检测范围等参数均未经验证。

吖啶酯作为标记物的直接化学发光相比其他检测方法具有明细优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，可以两点定标，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。

发明内容

基于此，有必要提供一种检测灵敏度较高的腺病毒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

一种腺病毒化学发光免疫检测试剂盒，包括：腺病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。

在一个实施例中，所述腺病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述腺病毒重组蛋白与所述羧基化的磁微粒的比例为1：25~35。

在一个实施例中，所述抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物中，所述腺病毒重组蛋白与所述化学发光标记物的比例为50：1~10。

在一个实施例中，所述羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。

在一个实施例中，所述化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。

在一个实施例中，还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液。

在一个实施例中，所述A液为H₂O₂溶液，所述B液为NaOH溶液。

在一个实施例中，还包括腺病毒定标品。

在一个实施例中，所述腺病毒定标品为浓度分别为1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的腺病毒的溶液。

一种上述的腺病毒化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

取羧基化的磁微粒的悬浮液，磁分离去上清后用MES缓冲液重悬，接着加入EDC水溶液，活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接着加入腺病毒重组蛋白，室温下混悬2h~10h，磁分离去除上清后用Tris缓冲液重悬，得到腺病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒；以及

取抗人免疫球蛋白，加入碳酸盐缓冲液后混匀，然后加入化学发光标记物后混匀，室温下避光反应1h~2h后除杂，得到抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。

这种腺病毒化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成腺病毒的检测这种腺病毒化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到1U/L，相对于传统的腺病毒的检测方法灵敏度至少提高了10倍，这种腺病毒化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。

附图说明

图1为一实施方式的腺病毒化学发光免疫检测试剂盒的制备方法的流程图；

图2为实施例3得到的腺病毒标准曲线图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

一实施方式的腺病毒化学发光免疫检测试剂盒，包括：腺病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。